研究課題
1. 現在、長期腹膜透析（PD）が、生体の腹膜に与える影響、特に補体活性系とその制御系のバランスに与える影響の検討を継続して進めている。本年度はPD透析導後1～3年の間のPD患者の排液中の腹膜中皮初代培養細胞（HMPC）を用いて、膜補体制御因子（CRegs）の発現の変化について検討し、CRegsの中でCD46やCD59と異なり、CD55が時間経過とともに中皮細胞への発現が増強する傾向を確認した。さらに長期の5年以降のPD患者の排液、PD導入期の排液、腹膜炎発症による影響を明らかにするために、現在検体の収集と解析を進めている。また、腹膜がPDにより影響を受けると考えられる個々の要因についてMet-5A細胞を用いて検討を進めている。2. 腹膜傷害への治療介入を期待して、現在、抗補体薬としてヒトに既に使用されているC1インヒビターを用いて真菌性腹膜炎の実験動物モデル（ラット）で検討を進めている。また、ヒトで観察されるEPSへ至る変化を、動物モデルを用いて補体の関与について検討を進めている。このために海外共同研究者から補体関連蛋白の欠損マウスとノックアウトマウスの使用のための手続きをほぼ完了した。一方で、腎不全動物モデル（5/6腎摘ラットモデル）を作成し、これに腹膜傷害を誘導して尿毒症の効果の検討を新たに開始した。3. PD排液を用いて、腹膜が実際に受けている影響を明らかにするために、これまでに行っていた補体活性化産物の一つsC5b-9の測定に加えて、補体活性化経路の基本経路であるAlterative pathwayに注目して、ELISA系を用いて腹膜透析液排液中のC3a、プロパジンの測定を開始した。
3: やや遅れている
概要1について、ほぼ計画通りに進んでいる。これまでラットから得た腹膜中皮初代細胞の検討でPD液によるCRegs発現の変化の可能性について報告しているが、ヒト由来の中皮細胞を用いたin vitroの実験で再現できていなかった。今回、mRNAの評価までであるが、確認することができた。PD排液から得られる検体については長期のフォローアップが必要なため、今後も継続して進めて行く。PDに関わる要因を細分化して行うMet-5A細胞を用いた実験についても、ほぼ予定どおり進んでいる。概要2について、実験動物モデルの安定性の問題で、実験の再現性確認のために時間を要している。また、補体関連蛋白の欠損マウスとノックアウトマウスの使用のための国内および国外の手続きに時間を要したため、当初の予定より半年程度の遅れが発生している。概要3について、検体収集は順調に行えている。ELISAによる補体成分の測定も順次進めている。
概要1については、これまでに明らかにした結果について報告してきたが、さらに1年～2年に渡る時間経過に伴う実験結果の解析のために、不足している母集団を増やすべく、研究を継続中である。概要2について、補体関連蛋白の欠損マウスとノックアウトマウスの使用のための事務手続きが終了し、これから輸送を行うため、今後、凍結胚からもどす作業のための時間を本年は要する。その後は速やかに実験に移っていく予定である。C1インヒビターによる治療実験の再現性はほぼとれたため、今後、結果をまとめて公表していく方向で進めていく。概要3について、現在もPD排液検体の収集を続けているが、補体系の受ける影響について、これまでの検体を用いた測定と臨床経過との比較を行っていく。
購入した試薬が今年度中に納品されなかったため、来年度に購入する試薬に充てる予定である。
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すべて 雑誌論文 (7件) (うち国際共著 1件、 査読あり 7件) 学会発表 (11件) (うち国際学会 11件)
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