研究課題/領域番号 |
18K08223
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研究機関 | 東京女子医科大学 |
研究代表者 |
森山 能仁 東京女子医科大学, 医学部, 准教授 (20439821)
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研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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キーワード | カベオラ / アルブミン / 糸球体内皮細胞 / 糸球体上皮細胞 / エンドサイトーシス / トランスサイトーシス / エキソサイトーシス / 蛋白尿 |
研究実績の概要 |
これまで我々はアルブミン尿の新機序としてカベオラを介し糸球体内皮細胞を通過する経路を解明・報告し、更にカベオラ経路を阻害することによるアルブミン尿の減少効果を狙う新規治療の解明を進めてきた。 2018-9年度にかけ、カベオラが細胞内へ進入する際ダイナミンが関与することに着目し、ダイナミン阻害効果のあるセルトラリン(臨床では選択的セロトニン再取り込み阻害薬としてうつ病に使用)の使用により①糸球体上皮細胞・内皮細胞におけるアルブミンの細胞内への取り込み抑制効果、②transwells plateを用いての細胞の対側へのアルブミンの排出量の減少、③ピューロマイシン腹腔内投与ネフローゼ症候群モデルマウスに対するアルブミン尿減少効果を証明しアメリカ腎臓学会、日本腎臓学会にて発表し、Am J Nephrolに報告した。 2019-20年度にかけ、糸球体上皮細胞へのカベオラを介してのアルブミンのエンドサイトーシス、トランスサイトーシスとして微小管、エンドソーム、ライソソームが関連することとアクチン、プロテアソーム、小胞体、ゴルジ体は関連しないことをwesternblottingと免役染色法を用い証明、学会にて報告した。更にアルブミンに免疫金染色を行い電子顕微鏡にてアルブミンを直接観察することを行った。 また、モデルマウスに関してはストレプトゾトシン腹腔内投与糖尿病性腎症モデルマウスの作成を進め、カベオラを介する細胞内通過経路がその他の腎炎・腎症においてもアルブミン尿の原因となることを調べている。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
ストレプトゾトシン腹腔内投与による糖尿病性腎症のモデルマウスの作成は順調に行うことができ、薬剤の投与実験は概ね順調に進んでいる。しかし、電子顕微鏡におけるアルブミンの免疫金染色がかなり難航したために、大幅に実験のプロトコール作成に時間を要したこと、研究室、動物実験室の移転により研究活動が限られたこと、コロナ感染に伴い業務の多忙化による活動制限などにより研究がやや遅延した。
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今後の研究の推進方策 |
電子顕微鏡における免疫金染色アルブミンの観察プロトコールを確立し、糸球体内皮細胞・上皮細胞内のアルブミンの通過経路、動物実験における糸球体係蹄のアルブミンの通過の観察を実際に可能にする。 また、種々の腎炎・腎症のモデルマウスの作成を行うことにより、アルブミン尿の新機序としての細胞内通過経路が普遍的なものであることを、電子顕微鏡も用いて証明する。 更にアルブミンのカベオラ経路の抑制効果の薬剤により種々の腎炎・腎症のアルブミン減少効果が得られることを証明し、腎炎・腎症に対して広く有効な薬剤の研究を行い、将来的な臨床応用につなげる可能性を探る。
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次年度使用額が生じた理由 |
研究室、動物実験室の移転により研究活動が限られたこと、コロナ感染に伴い業務の多忙化による活動制限などにより研究がやや遅延したため、物品のみ購入しストレプトゾトシン腹腔内投与の糖尿病性腎症モデルマウスの薬剤の検証の追加実験を次年度に予定している。
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