研究課題
糖尿病性腎臓病(diabetic kidney disease, DKD)の進展における2つのフルクトース代謝酵素ケトヘキソキナーゼAとC(KHK-A・KHK-C)の役割を解析する。1) KHK-A KO・KHK-C KO・KHK-A/C KOマウスを用いた検討既にKHK-A KO・KHK-A/C KOマウスは保有しており、KHK-C KOマウスの作成をCRISPR/Cas9システムを用いて作成中である。1本のgRNAおよび2本のgRNAを用いでマウスKHK-Cを欠損する遺伝子改変マウスを作成し、それぞれから複数のlineを取得。現在、コロニーを拡大し、offspringを用いたoff targetについての解析を進めている。2) マウスKHK-C antisenseの作成し、DKDに対する治療効果を検討するKHK-A・KHK-Cはexon3のsplicing variantであり、それぞれexon3a・exon3cを有することから、exon3cを標的としたマウスKHK-C antisenseの候補配列を構造解析も行いつつ複数決定した。KHK-Cは生体内においては腎の近位尿細管に高発現するが、不死化細胞および初代培養細胞においてはその発現が低下することから、マウスKHK-C antisenseのKHK-C発現抑制効果の確認のため、マウスKHK-C・マウスKHK-Aを強制発現するHK-2細胞株を樹立した。
2: おおむね順調に進展している
CRISPR/Cas9システムを用いたKHK-Cを欠損する遺伝子改変マウスは、複数のlineが樹立できており、そのoffspringも得られている。またoff targetの解析も終了しつつある。また、マウスKHK-C・マウスKHK-Aを強制発現するHK-2細胞株の樹立、マウスKHK-Cを標的とするantisenseの候補配列も決定・合成も終了している。
1) CRISPR/Cas9システムを用いたKHK-Cを欠損する遺伝子改変マウスのoff targetの解析をさらに進める。終了後、ストレプトゾトシンを用いたI型糖尿病モデルを作成し、KHK-C KOマウスにおけるDKDの進展抑制作用について解析する。2) KHKーC強制発現培養細胞を用い、antisenseによるKHK-C発現抑制効果を検討し、抑制効果の高い配列を選択する。その後、安定化修飾したKHK-C antisenseを用いてin vivoにて検討する。
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すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (1件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (1件) (うち国際学会 1件)
Metabolism
巻: 85 ページ: 161-170
10.1016/j.metabol.2018.03.020