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自然リンパ球(innate lymphoid cell: ILC)は、肺、腸管、皮膚の上皮直下に局在し、外的刺激に対する自然免疫応答を制御する役割を担うため、アレルギー炎症におけるバリア機能への関与が示唆されている。実際、自然リンパ球は気管支喘息やアトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患の上皮直下に分布し、それらの病態に深く関与している。そのため、アレルギー炎症に深く関与する自然リンパ球をいかに制御できるかが重要と考えられる。しかしながら、アトピー性皮膚炎について、自然免疫を担うToll様受容体 (Toll-like receptor: TLR)に着目して自然リンパ球をいかに制御するかについては、明らかになっていない。そのため、本年度は、本研究に用いる、ヒト2型自然リンパ球の同定を行い、複数のセルラインを作成した。自然リンパ球はヒト末梢血を用いた。フローサイトメーターを使用し、Lineage陰性IL-7レセプター陽性分画を同定した。次いで、抗CD294抗体を用いて2型自然リンパ球を同定した。さらに、2型自然リンパ球に関して、セルソーターを用いて分取し、培養した。本実験は、異なる末梢血を用いて検証した。他方、ヒトケラチノサイトの培養系を確立し、ケラチノサイトと自然リンパ球との共培養システムを用いて、培養上清中のサイトカイン産生についてELISA法で検証した。さらに、TLRリガンド刺激下でのバリア機能を測定し、サイトカイン産生について、タンパク発現レベルをELISA法で測定中である。
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