新規実験システムを用いた血小板インテグリン制御分子の多角的解析とその応用

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18K08326
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 冨山 佳昭 大阪大学, 医学部附属病院, 特任教授(常勤) (80252667)
• 研究分担者: 柏木 浩和 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (10432535) ; 加藤 恒 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (20705214)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: インテグリン / GPIIb-IIIa / Kundlin3 / CalDAG-GEFI

研究実績の概要

本研究では、血小板機能の中核をなすインテグリンαIIbβ3(GPIIb-IIIa)の制御分子の同定、解析を目的としている。申請者らは、本研究においてすでにインテグリンαIIbβ3活性化の制御分子であるCalcium and diacylglycerol (DAG)-regulated guanine nucleotide exchange factor I (CalDAG-GEFI)の欠損例（世界４例目）の同定およびその機能解析に成功している（Blood 2016）。インテグリンαIIbβ3活性化はinside-outシグナルで制御され、ADPやトロンビンなど血小板アゴニスト刺激に始まり、CalDAG-GEFIによるRap1活性化、続いて起こるtalin、kindlin-3とβ3細胞内領域との結合が必須であると考えられている。今年度は、申請者らが本邦で初めて見出したkindlin-3欠損症に関して、詳細な検討を行った。
症例は生後8か月の女児（両親はいとこ婚）で、新生児より広汎な皮下出血を呈していた。αIIbβ3の発現は正常であったが、その活性化は、ADP、PAR1など検討したすべてのアゴニストに対して高度に障害されていた。CalDAG-GEFIの発現は正常である一方、kindlin-3の発現が検出されなかった。kindlin-3の遺伝子解析より、277番のトリプトファン(TGG)が1塩基置換によりストップコドンに変異(TAG)して、完全欠損することが判明した。流動下における血小板血栓形成は、高度に障害されており、αIIbβ3が欠損している血小板無力症と比べても、より障害が強かった。好中球におけるLFA-1（αLβ2）活性化を検討すると、β2の活性化も障害されていることが明らかとなった。この成績よりkindlin-3がインテグリン活性化に必須の分子であることが示された

研究成果

• [雑誌論文] Knock-in mice bearing constitutively active αIIb(R990W) mutation develop macrothrombocytopenia with severe platelet dysfunction. (2020)
  • 著者名/発表者名: Akuta K, Kiyomizu K, Kashiwagi H, Kunishima S, Nishiura N, Banno F, Kokame K, Kato H, Kanakura Y, Miyata T, Tomiyama Y.
  • 雑誌名: J Thromb Haemost. 巻: 18 ページ: 497-509
  • DOI: 10.1007/s12185-019-02763-2
• [雑誌論文] . Efficacy and safety of romiplostim in refractory aplastic anaemia: a Phase II/III, multicentre, open-label study. (2020)
  • 著者名/発表者名: Jang JH, Tomiyama Y, Miyazaki K, Nagafuji K, Usuki K, Uoshima N, Fujisaki T, Kosugi H, Matsumura I, Sasaki K, Kizaki M, Sawa M, Hidaka M, Kobayashi N, Ichikawa S, Yonemura Y, Enokitani K, Matsuda A, Ozawa K, Mitani K, Lee JW, Nakao S.
  • 雑誌名: Br J Haematol. 巻: 192 ページ: 190-199
  • DOI: 10.1111/bjh.17190
• [雑誌論文] Risk factors for skin, mucosal, and organ bleeding in adults with primary ITP: a nationwide study in Japan. (2020)
  • 著者名/発表者名: Hato T, Shimada N, Kurata Y, Kuwana M, Fujimura K, Kashiwagi H, Takafuta T, Murata M, Tomiyama Y.
  • 雑誌名: Blood Adv. 巻: 4 ページ: 1648-1655
  • DOI: 10.1182/bloodadvances.2020001446
• [雑誌論文] Reevaluation of platelet function in chronic immune thrombocytopenia: impacts of platelet size, platelet-associated anti-αIIbβ3 antibodies and thrombopoietin receptor agonists. (2020)
  • 著者名/発表者名: Nishiura N, Kashiwagi H, Akuta K, Hayashi S, Kato H, Kanakura Y, Tomiyama Y.
  • 雑誌名: Br J Haematol. 巻: 189 ページ: 760-771
  • DOI: 10.1111/bjh.16439
• [雑誌論文] Reference guide for management of adult immune thrombocytopenia in Japan: 2019 Revision. (2020)
  • 著者名/発表者名: Kashiwagi H, Kuwana M, Hato T, Takafuta T, Fujimura K, Kurata Y, Murata M, Tomiyama Y
  • 雑誌名: Int J Hematol. 巻: 111 ページ: 329-351
  • DOI: 10.1007/s12185-019-02790-z
• [学会発表] ガイドラインの「科学的根拠」に関する考察. (2020)
  • 著者名/発表者名: 冨山佳昭
  • 学会等名: 第68回日本輸血・細胞治療学会総会（2020.5.29, 紙上開催, 紀野修一）
• [学会発表] ITPと血小板輸血 (2020)
  • 著者名/発表者名: 柏木浩和, 冨山佳昭
  • 学会等名: 第68回日本輸血・細胞治療学会総会（2020.5.29, 紙上開催, 紀野修一）
• [学会発表] 新規のインテグリンαIIbβ3非活性化変異β3(R734C)を認めた一家系 (2020)
  • 著者名/発表者名: 芥田敬吾, 柏木浩和, 西浦伸子, 加藤恒, 保仙直毅, 金倉譲, 冨山佳昭
  • 学会等名: 第42回日本血栓止血学会学術集会（2020.7.1-31, 紙上開催・オンデマンド, 冨山佳昭）
• [学会発表] 血小板機能異常症解析からのメッセージ：血小板血栓制御機構（会長シンポジウム） (2020)
  • 著者名/発表者名: 加藤 恒
  • 学会等名: 第42回日本血栓止血学会学術集会（2020.7.1-31, 紙上開催・オンデマンド, 冨山佳昭）