| 研究課題/領域番号 |
18K08367
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
古林 勉 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (00624793)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 多発性骨髄腫 / クローン進展 / SGO1 / BUB1 / 染色体分配異常 |
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| 研究実績の概要 |
B細胞性リンパ腫(BCL)や多発性骨髄腫(MM)などのリンパ系腫瘍における難治病態形成に際する共通の現象として、染色体・ゲノム不安定性に伴うクローン性進化が挙げられる。しかしながら、その分子メカニズムは不明点が多く、その克服戦略も皆無である。そこで、本研究では、染色体分配制御分子であるSGO1、ならびに関連分子の発現や制御異常に焦点をあて、高悪性度BCLと不治の疾患であるMMの染色体・ゲノム不安定性獲得のプロセスにおける機能的意義について明らかにすることで「クローン性進展」の分子メカニズムの解明と新規制御戦略の開発を目指した研究を進めている。平成30年度には、MM細胞株、BCL細胞株、患者由来腫瘍細胞のSGO1の発現状態も検討から、MMの腫瘍細胞において発生母地である形質細胞と比べ、SGO1の発現上昇を認めることが定量的RTPCR、タンパクレベルでの解析で確認される一方、悪性リンパ腫細胞株では、4株のみで軽度の発現上昇を認めるにとどまった。このため、以後の検討はMMにおけるSGO1、ならびに周辺関連分子の機能解析に焦点を当てることにした。現在、レンチウイルスベクターを用いてSGO1発現抑制MM細胞株亜株を作成し、細胞増殖能、コロニー形成能、染色体分配異常、抗ガン剤感受性について検討中である。また、興味深いことにSGO1発現制御と、SGO１との相互機能関与が知られる染色体分配制御分子BUB1の発現が相関すること、MMにおいて疾患進行と相関する発現亢進を認めることを見出し、現在、BUB1についても機能解析を進めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成30年度は、まずMM細胞株、BCL細胞株の10種ずつについて、SGO1の発現状態を検討することから研究を開始した。その結果、MM細胞株において発生母地である形質細胞と比べ、約8-60倍、SGO1の発現上昇を認めることが定量的RTPCRにより明らかになり、タンパクレベルでも同様の結果が確認された。一方、悪性リンパ腫細胞株では、4株のみで軽度の発現上昇を認めるにとどまり、また、発現亢進している細胞株でも2倍程度の発現にとどまった。次にMM臨床検体計54検体でSGO1発現を検討したところ、患者由来初代細胞でも病初期からSGO1発現が概ね3倍程度に亢進し、さらに病期進行に伴って、患者間でのばらつきはあるものの最大10倍程度まで発現上昇することが明らかになった。これらのことから、SGO1発現亢進はMMにおいてより関与が高度である可能性が推測されたため、以後の検討はMMにおけるSGO1、ならびに周辺関連分子の機能解析に焦点を当てることにした。現在、レンチウイルスベクターを用いてSGO1発現抑制MM細胞株亜株を作成し、細胞増殖能、コロニー形成能、染色体分配異常、抗ガン剤感受性について検討中である。また、興味深いことにSGO1発現制御と、SGO１との相互機能関与が知られる染色体分配制御分子BUB1の発現が相関すること、MMにおいて疾患進行と相関する発現亢進を認めることを見出し、現在、BUB1についても機能解析を進めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
レンチウイルスベクターを用いた遺伝子導入によるSGO1、BUB1の遺伝子発現抑制細胞株亜株において、細胞増殖能、コロニー形成能、染色体分配異常、抗がん剤感受性などの解析を引き続き継続する。これまでに実施したSGO1、BUB1発現抑制細胞の形質に関する検討からは、短期的な細胞増殖能には顕著な変化がない一方で、コロニー形成能の低下を認め、これらの分子のクローン性細胞増殖における機能的関与が推測されるほか、分裂期細胞の詳細な観察により、染色体分配や紡錘体形成への機能的関与、紡錘体形成阻害に対する細胞死高感受性が推測される結果が得られており、平成31年度も、引き続き、その再現性、ならびに長期的観察における形質変化、分子生物学的異常の変化についての検討を継続することでSGO1,ならびにBUB1高発現の病態形成、ならびにクローン性進展における意義について検討する。また、SGO1とBUB1の相互発現制御メカニズムについての検討を進める予定である。一方、これまでのSGO1、BUB1発現抑制実験では、これらの分子の発現抑制の程度は最大でも10%程度までの低減にとどまっている。重要なことに、一過性であってもそれ以上の発現抑制が得られた細胞は短期間で細胞死に至る可能性が示される傍証が得られつつあり、これらの分子の治療標的としての妥当性の検証には、正常細胞におけるこれら分子の発現抑制に際する毒性を検討する必要がある。これらについても、引き続き検討を進める。
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