研究課題/領域番号 |
18K08372
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研究機関 | 順天堂大学 |
研究代表者 |
楊 インジェ 順天堂大学, 医学部, 助教 (90808643)
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研究分担者 |
小松 則夫 順天堂大学, 医学部, 教授 (50186798)
今井 美沙 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (50709003)
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研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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キーワード | 骨髄増殖性腫瘍 / 変異型CALR / 低分子化合物 |
研究実績の概要 |
フィラデルフィア染色体陰性の骨髄増殖性腫瘍(以下MPNと略する)は、造血幹細胞レベルに体細胞変異が生じることで引き起こされる造血器の腫瘍である。MPNの予後は概ね良好であるが、一部の患者は、血栓症の併発による著しいQOLの低下や、予後不良の骨髄線維症や急性白血病を発症する。最新の分子標的薬を用いても寛解には至らず、根治は、治療関連死のリスクのある造血幹細胞移植に限られていることから、根治を目指した有効な治療薬の開発が切望されている。 本研究では、変異型CALRによる腫瘍性細胞増殖を試験管内で再現した系を用いて、化合物ライブラリースクリーニングを行い、変異型CALR依存性の細胞増殖を阻害する11個の低分子化合物を取得した。さらに、取得した11個の低分子化合物の受容体下流シグナル伝達機構への影響を明らかにするため、変異型CALRによるTPO非依存性のMPL活性化が生じているUT-7/TPO細胞を、これらの化合物存在下で培養した上で、蛋白質抽出液を調製し、イムノブロット法を用いて、MPL下流シグナル伝達分子であるJAK2、ERK、STATファミリーの活性化状態を評価した。その結果、取得した11個のうち1個の低分子化合物において、これらのシグナル伝達系全てに阻害が見られた。今後は、この低分子化合物を用いて、変異型CALRによるMPLの活性化自体が抑制されている可能性について、変異型CALRとMPLの相互作用や、細胞内での局在部位の変化を明らかにする。 本研究の推進により、腫瘍細胞選択性の高い低分子化合物の作用機序を解明が進み、医薬候補分子としての可能性を明らかにされ、MPNの根治を目指した有効な治療薬の開発が期待される。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の計画通り、変異型CALRによるTPO非依存性のMPL活性化が生じているUT-7/TPO細胞を、11個の低分子化合物存在下で培養した上で、蛋白質抽出液を調製し、イムノブロット法を用いて、MPL下流シグナル伝達分子の活性化状態を評価した。その結果、取得した11個のうち1個の低分子化合物において、これらのシグナル伝達系全てに阻害が見られたことから、概ね研究は順調に進んでいると言える。
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今後の研究の推進方策 |
MPL下流シグナル伝達系に阻害を与えた低分子化合物を用いて、変異型CALRによるMPLの活性化自体が抑制されている可能性について、変異型CALRとMPLの相互作用や、細胞内での局在部位の変化を明らかにする。しかしながら、これらに関して阻害効果が見られない場合は、変異型CALRにより惹起された細胞内の異常により、低分子化合物による細胞増殖の抑制が起きていることが考えられることから、化合物を担体に共有結合させた上で、結合する蛋白質を質量分析により解析し、化合物の標的分子を同定する。いずれの場合も、明らかになった低分子化合物の作用点を、既知の薬剤やshRNAで阻害した際に、低分子化合物と同様の効果が得られることを明らかにすることで、取得した低分子化合物の作用機序を明らかにする予定である。
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次年度使用額が生じた理由 |
研究協力者の協力により、研究は順調に進んでいる。次年度使用額は、細胞の培養に必要な培地や血清、低分子化合物の購入費用などの一部に使用する予定である。
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