| 研究課題/領域番号 |
18K08374
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
田村 秀人 日本医科大学, 医学部, 准教授 (70256949)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 多発性骨髄腫 / KL-6 / 予後不良因子 / MUC1 |
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| 研究実績の概要 |
多発性骨髄腫(MM)には予後不良群が未だ存在し、その病態解明と治療法の開発が急務である。我々は、新規MM患者におけるMUC1上に存在するシアル化糖鎖抗原KL-6が血清中で高い例は予後不良である可能性を見出した。MUC1はムチンの1種の膜貫通型糖タンパクで、galectin-3(Gal-3)との相互作用による腫瘍進展能、KL-6産生に影響するMUC1遺伝子多型の存在、免疫チェックポイント分子PD-L1の発現調整能を有するが、MMにおいては不明な点が多い。そこで本研究では、KL-6およびMUC1ーgalectin-3経路によるMM増悪機序を明らかにすることを目的として研究を進めている。
１）多数MM患者におけるKL-6値と患者特徴や予後との関連を解析した。新規MM患者約200例において、KL-6高値(基準値500U/mL以上)例では基準値内の症例と比べ、Hb低値、血小板数低値、血清LDH高値と有意に相関し、さらに無増悪生存期間および全生存期間が有意に短く、予後不良であることを見出した。
２）血清KL-6上昇とMM細胞上MUC1・MUC1 mRNA発現を検討したところ、血清KL-6上昇とMUC1タンパク発現とDNAコピー数とは必ずしも相関しておらず、骨髄ストローマ細胞が産生する可溶因子、特にIL-6によるJAK-STAT経路の活性化を介して、MUC1発現が亢進、さらにKL-6産生も増強する可能性が考えられた。
現在、血清KL-6上昇とMUC1遺伝子多型や治療効果との関連、MM細胞のMUC1発現とKL-6産生の機序、MUC1とGal-3との結合によるシグナル伝達の解析、MUC1ーGal-3経路により腫瘍増殖や髄外移動能を亢進させるか、などについて解析中である。それらの知見より癌関連糖型MUC1を標的とした抗体治療薬などのMMに対する新規治療法の開発を目指す。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
臨床検体の測定は進み、臨床データとの相関解析が十分になされているものの、シグナル伝達経路の活性化解析、shRNAレンチウイルスシステムなどを用いたMUC1ノックダウンMM細胞の作成と解析など、in vitroの系がなかなか安定せず、予想された通りの結果を出すまで至っていない。今度、薬剤濃度や培養条件やシステムの変更を行い、安定した至適実験条件を見出し、研究を推進していく予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
A) 末梢血単核球のMUC1遺伝子多型rs4072037(PCR法)を解析し、MUC1遺伝子多型が血清KL-6値、MUC1タンパク発現、MUC1 mRNA発現、治療効果と関連があるか検討する予定。
B) ストローマ細胞上清あるいはIL-6などのサイトカインによりMM細胞のMUC1発現を増強させ、KL-6産生量との関連を解析。
C) MUC1発現MM細胞におけるKL-6・MUC1の機能解析：まず初めにMM患者の血清中Gal-3濃度とMM患者の臨床的特徴との関連について解析。次に、recombinant Gal-3添加によりMAPKやPI3K/Aktなどのシグナル伝達経路の活性化を解析、さらに腫瘍増殖能および髄外移動能について検討。また、Gal-3ーMUC1経路の効果を明らかにするため、MUC1ノックダウンMM細胞株を作成（shRNAレンチウイルスシステム）、それらの細胞を使用して解析。
D)癌関連糖型MUC1を抗原に用いて抗体作成を行い、その特異性に関してMM細胞株と正常末梢血単核球を対象にFCM法を用いてMM細胞特異的抗体を選出する。抗体作成ができれば、in vitroおよびマウスMMモデルを用いたin vivoにて、その抗体効果を検証する。また、MUC1およびPD-L1発現亢進に関与する共通microRNAおよび遺伝子発現に関してマイクロアレイを使用した網羅的解析を行い、MUC1のPD-L1調整機能について検討。今後、これらの研究を継続、推進していく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
骨髄腫細胞株を使用した実験系が安定せず、研究を予定通りに実験が進行しなかったため、予定物品を一部購入できず来年度に使用するようにしたため、一部物品費が余剰したため。
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