| 研究課題/領域番号 |
18K08439
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| 研究機関 | 大分大学 |
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研究代表者 |
平松 和史 大分大学, 医学部, 教授 (80301381)
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| 研究分担者 |
門田 淳一 大分大学, 医学部, 特任教授 (50233838)
小宮 幸作 大分大学, 医学部, 准教授 (50727550)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | Candida albicans / siRNA / (1,3)β-D-グルカン |
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| 研究実績の概要 |
昨年度に引き続いて、合成したsiRNAのin vitroでのCandida albicansの増殖抑制効果の検討を行った。siRNAとして、Candia albicansの(1,3)β-D-グルカン合成に関与するCaFKS1遺伝子に対する新しいsiRNA配列を設計した（siRNA7、8）。siRNA7およびsiRNA8の2種類のsiRNAを新たに合成し、合成したsiRNAには真菌内への取り込みを高効率とするためにコレステロールを修飾した。Candida albicans ATCC 60913株、2091株、26790株の3株をそれぞれ100 CFU/mlとなるように調整し、siRNAを5μMの濃度となるように混合した。その後混合液を培養し、経時的に菌量を測定した。siRNAを含まないATCC 26790株のコントロール群では、5時間後：500 CFU/ml、15時間後：194000 CFU/ml、19時間後：1770000 CFU/ml、26時間後：8300000 CFU/ml 41時間後：20600000 CFU/ml 51時間後：32000000 CFU/mlへと経時的に菌量は増加していた。他のATCC 60913株や2091株もほぼ同様の増殖曲線を示していた。2種類のsiRNAをそれぞれ添加した群においても、ほぼ同様に経時的に菌量の増加を認めており、明らかな菌量の減少傾向は認めなかった。この傾向はsiRNA7や8とCandida albicans ATCC 60913株、2091株、26790株のいずれの組み合わせでも同様の結果であった。一方で、培養開始直後の5時間や15時間目まではコントロール群の方がsiRNA添加群よりも、2倍程度菌量が多い傾向にあった。こうした結果は菌量に比べて添加するsiRNA量が少ないためにsiRNAの抑制効果が得られない可能性が考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
計画したin vitroにおけるsiRNAの増菌抑制効果の検討は予定通り実施することができている。一方で、想定していたin vitroで増菌を抑制するsiRNAを検出することができていない。そのためin vivoでの検討に進むことができず、「やや遅れている」と判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年度の検討結果で培養開始後の15時間までは、siRNA添加群に比べてコントロール群の方が菌量が多かった。こうした結果から、siRNA量が少ないことが、増菌抑制効果を見い出せない原因の一つと考えられた。そのため現在、siRNAの添加量を５μMの濃度で検討を行っているが、より高い濃度での検討を行う予定にしている。また経時的にsiRNAを追加で添加し、増菌抑制効果が得られないかどうかを検証することとしている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
培地やピペットなどの消耗品は前年度購入した機材で実験が実施可能であった。また、in vitroで効果が認められたsiRNAを用いて、in vivoでの検討を行う予定であったが、in vitroで効果を認めるsiRNAを見い出していないため、in vivoでの検討が行えず、マウスの購入などができないことも次年度使用額が生じた理由である。次年度にはさらに条件変更などを行い、in vitroにおいて増菌抑制効果を示すsiRNAを見い出すよう実験を進めることで繰越額を使用していく予定である。
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