| 研究課題/領域番号 |
18K08514
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
井口 元三 神戸大学, 医学部附属病院, 講師 (60346260)
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| 研究分担者 |
高橋 裕 神戸大学, 医学研究科, 准教授 (70301281)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 自己免疫性下垂体疾患 / 抗PIT-1 抗体症候群 / 腫瘍随伴症候群 |
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| 研究実績の概要 |
１）診断マーカーおよび治療ターゲットの同定：現在、下垂体機能低下症の患者（ACTH単独欠損症（46例）およびICI関連下垂体炎症例（18例））の血清を用いた免疫染色でラット下垂体のACTH産生細胞を特異的に認識する自己抗体の存在を複数症例において確認した。ラット正常組織および細胞株において実際に発現しているか定量的PCR等を用いて確認を進めている。
２）疾患発症メカニズムの解析：既に抗PIT-1 抗体症候群患者の胸腺腫瘍におけるエクソーム解析およびメチローム解析を行っており、正常者および他の胸腺腫患者からのデータと比較することで候補遺伝子を選定した。今後、胸腺腫瘍患者に共通する点がないかについて、呼吸器外科から供与いただく胸腺摘出サンプルを用いて候補遺伝子の異所性発現や自己抗体について上記と同様の手法を用いて検討する。
３）細胞障害性T細胞の機能解析：すでに稼働している疾患特異的iPS細胞の作製法を用いて、実際に細胞障害性T細胞（CTL）が関与しているかを検討している。① 患者から作成した疾患特異的iPS細胞を用いて下垂体分化モデルを作成し、HLA class I上にepitopeが結合して複合体を形成し下垂体細胞表面に提示されるかを、Proximity Ligation アッセイ(PLA)を用いて解析した。② さらに、下垂体分化モデルに患者血中から単離した細胞障害性T細胞（CTL）を作用させることにより、ホルモン分泌細胞に対してCTLが自己免疫機序を生じさせるメカニズムをex vivoで検討する。本年度中に、①に関して抗PIT-1 抗体症候群患者でのPLAアッセイにて解析を行い、結果を投稿準備中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
１）診断マーカーおよび治療ターゲットの同定：下垂体機能低下症の患者数は順調に増加しており、ICI関連下垂体炎症例は申請時６例から１８例となっている。）これらの血清を用いた免疫染色でラット下垂体のACTH産生細胞を認識する自己抗体の存在を確認した。ラット正常組織および細胞株において実際に発現しているか定量的PCR等を用いて確認を進めている。
２）疾患発症メカニズムの解析：胸腺腫瘍と自己免疫性下垂体疾患の関連に関して検討し、既に抗PIT-1 抗体症候群患者の胸腺腫瘍におけるエクソーム解析およびメチローム解析を行っており、正常者および他の胸腺腫患者からのデータと比較することで候補遺伝子を選定した。今後、胸腺腫瘍患者に共通する点がないかについて、呼吸器外科から供与いただく胸腺摘出サンプルを用いて候補遺伝子の異所性発現や自己抗体について上記と同様の手法を用いて検討する。
３）細胞障害性T細胞の機能解析：患者から作成した疾患特異的iPS細胞を用いて下垂体分化モデルを作成は終了し、HLA class I上にepitopeが結合して複合体を形成し下垂体細胞表面に提示されるかを、PLAを用いて解析した。本年度中に、①に関して抗PIT-1 抗体症候群患者でのPLAアッセイにて解析を行い、結果を投稿準備中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
予定通り下記の研究を進めていく予定である。
１）下垂体機能低下症の患者血清からIgG を抽出し、正常組織ならびに細胞株由来のタンパクと患者IgG で免疫沈降を行い、質量分析にて抗原の可能性がある分子を同定する。加えて、免疫染色を行い抗原の発現の有無、抗体の存在につき確認を行う。
２）胸腺腫瘍患者に共通する点がないかについて、呼吸器外科から供与いただく胸腺摘出サンプルを用いて候補遺伝子の異所性発現や自己抗体について上記と同様の手法を用いて検討する。
３）下垂体分化モデルに患者血中から単離した細胞障害性T細胞（CTL）を作用させることにより、ホルモン分泌細胞に対してCTLが自己免疫機序を生じさせるメカニズムをex vivoで検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
（理由）消耗品の一部に海外からの発送が遅れ今年度中の決済ができなかったため、6,288円の繰り越しが生じた。
（使用計画）次年度中に使用する予定である。
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