| 研究課題/領域番号 |
18K08560
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| 研究機関 | 旭川医科大学 |
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研究代表者 |
宮城 久之 旭川医科大学, 医学部, 助教 (50596442)
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| 研究分担者 |
本多 昌平 北海道大学, 大学病院, 講師 (90588089)
荒 桃子 北海道大学, 大学病院, 医員 (30741219)
池田 哲夫 福岡歯科大学, 口腔歯学部, 教授 (60585701)
高桑 恵美 北海道大学, 大学病院, 助教 (20646244)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 直腸肛門奇形 / 組織立体再構築 / メチル化 |
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| 研究実績の概要 |
研究代表者らはレチノイン酸（RA）を過剰投与して直腸肛門奇形（ARM）マウスを作成し細胞の発現や分化を制御するSonic hedgehog（Shh）やBone Morphogenetic Protein 4（BMP4）といった遺伝子蛋白の直腸肛門領域での発現について検討してきた。一方で正常肝細胞および肝芽腫腫瘍検体のDNAメチル化プロフィールに基づく解析と発現アレイ解析で得られた遺伝子を照らし合わせることによってがん抑制遺伝子を抽出する研究方法を確立してきた。今回ARMマウスでARM発生過程の基盤となる排泄腔形成から正常な後腸分化誘導の阻害過程および骨盤内臓器群が協調発生するメカニズムについて、Shhを受容した細胞が遠位尿道上皮に特異的に発現するCre遺伝子を取り込み移動し分化・増殖していく過程を組織立体再構築の手法を用いてエピゲノム解析による分子生物学的発生機構の解明を行うことにある。
昨年度はマウスに催奇形性物質であるレチノイン酸(RA)を過剰投与し直腸肛門奇形(ARM)マウスを作成し、胎仔において直腸肛門奇形や尾の形態異常誘導の可否につき検討する予定であり、RA投与量、投与日数について検討し、修正した予定通りARMモデルマウス作成に成功した。
本年度は作成したARMモデルマウスの連続薄切スライド標本作成し、これをスキャンし組織立体再構築を行うことに成功した。現在、免疫染色を追加し詳細な分析を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
直腸肛門奇形モデルマウスの作製に成功し、本年度は、連続組織切片スライドを作製し、組織立体再構築による解析に成功している。
しかし、コロナ禍であることから、新規マウス購入を控えて、前年度ホルマリン固定したマウス胎仔を用いて、スライド作成、3D画像構築、免疫染色を外注にて行って、解析をすすめるにとどまっている。
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| 今後の研究の推進方策 |
新型コロナウイルスの影響で2020年2月以降、新規マウスを用いた研究は休止しているが、状況をみつつ、新規マウスから鎖肛モデルマウスを作成し、生検体を用いた免疫組織化学的検査、さらにはメチル化ビーズアレイ解析およびmRNA発現アレイ解析へと進める予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
免疫組織化学的検査の外注費用、さらにDNAメチル化解析に外注委託を検討しており、これらの費用として使用したい。
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