| 研究課題/領域番号 |
18K08597
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
田原 裕之 広島大学, 病院(医), 助教 (30423354)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | ヒト化マウス / 慢性拒絶反応 |
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| 研究実績の概要 |
本研究ではHLA抗体産生ヒト化マウスモデルにおいて、DSA産生を抑制するメカニズムの解明を目的とする。
・ヒト化マウスモデルにおける抗ドナー特異的抗体(DSA)産生抑制メカニズムの解析
HLA抗体を安定して産生するヒト化マウスは作製済みであるが、ドナー特異的HLA抗体(DSA)の産生のみ抑制がかかっていたため、これまでの実験系において別の抗体産生促進シグナルが欠如しているためにDSA産生が認められなかった可能性があると考え、B細胞から抗体産生促進を活性化するBAFF(B cell activating factor belonging to the TNF family)-BAFF受容体シグナルを加えた実験系を試みた。naive NSGマウスへ投与する前段階のレシピエントとドナー末梢血単核球in vitro混合培養中には、ヒトCD40リガンド発現マウス線維が細胞と混合培養しているが、これにさらにヒトBAFFを遺伝子導入して同様にHLA抗体産生を調べた。しかしながら目的とするDSA産生は確認できなかった。さらに、制御性T細胞が抗体産生B細胞の抑制化に関与している可能性があるため、培養中のレシピエント制御性T細胞をCD4+CD25+ regulatory T cell isolation kit(Miltenybiotec)を用いて除去した状態で新たにHLA抗体産生ヒト化マウスモデルを構築し解析したが、やはりDSAの産生は認められなかった。このin vitro混合培養中に接触の密な状態での特異的抗原にのみ抗体産生を抑制しうるメカニズムが潜在しているものと考え、今後は抑制性シグナルのブロックによるDSA抗体産生の有無を確認していく。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
これまでに作成したHLA抗体産生マウスにおいて、目的とするドナー特異的抗体の産生のみが得られない事象は変わりなく、特異的抗原に対する抗体産生B細胞へ分化するシグナルの存在をブロッキングアッセイで確認していくことが、解明につながるものと考えており、研究の進捗状況としてはおおむね予想通りである。
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| 今後の研究の推進方策 |
同様のHLA抗体産生ヒト化マウスモデルにおいて、複数存在する抗体産生促進ないし抑制シグナルを活性化ないし抑制することで抗体産生パターンの違いを確認していく。また、ドナーHLA抗原がレシピエント細胞に十分に認識されていない可能性を考え、ドナー末梢血単核球を混合培養前にConcanavalin A(和光純薬工業)で刺激することによりHLA抗原発現を増強させた状態でより強力にHLA抗体産生するヒト化マウスを構築を目指す。さらには、ヒト化マウス体内や末梢血混合培養中は抗体産生細胞活性化を促進するヒトサイトカインが欠如しているため、HLA抗体産生促進に関与するhuman IL-6やhuman IL-21 receptor blocking抗体の添加を行いDSA産生の増加を目指す。このようにしてDSA産生増加が認められれば、DSA産生を抑制していたkey moleculeが同定されることになる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初予定していた、ドナー特異的HLA抗体抑制機序解明のための抑制シグナルブロッキングアッセイの実験系が、次年度に延長したため、その実験に必要な抗体や試薬は次年度に使用する運びとなったため。
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