| 研究課題/領域番号 |
18K08605
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| 研究機関 | 桐蔭横浜大学 |
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研究代表者 |
奥井 理予 桐蔭横浜大学, 先端医用工学センター, 講師 (20327654)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | PARP阻害剤 |
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| 研究実績の概要 |
BRCA1/2は、二本鎖DNAの修復に重要な役割を果たす遺伝子である。BRCA1/2遺伝子に変異を有する患者は、トリプルネガティブ乳癌（TNBC）や遺伝性乳癌卵巣癌（HBOC）を発症するが、明らかなターゲットが存在しないため、治療が難しい。ポリ（ADP－リボース）ポリメラーゼ（PARP）の阻害剤であるolaparibは、従来の抗がん剤に比べて副作用が少なく、TNBCやHBOCに有効であることが報告され、臨床試験による評価が期待されている。しかし、olaparibを用いた併用療法については様々な組合せが考えられ、未だ確立されていない。
Brca1遺伝子とBrca2遺伝子のノックアウト（KO）マウスは、いずれも胎生致死で解析が難しい。そこで、申請者らの研究グループは、Brca2遺伝子の発現を脳特異的に抑制したコンディショナルKO (cKO) マウスを作製し、これらのマウスが高頻度に髄芽腫を発症することを報告した。また、Brca2 cKOマウスの髄芽腫から独自に細胞株を樹立後、TaqMan MicroRNA Arrayによる発現解析を行った結果、olaparib感受性を亢進するmicroRNAとして、miR-X、miR-Y、miR-Zを同定した。
本研究課題の目的は、TNBCやHBOCに対して有効なolaparib併用療法とそのメカニズムを明らかにすることである。令和元年度は、ヒトTNBC細胞株（MDA-MB-453、MDA-MB-231）にolaparibと各種抗癌剤を併用し、ウェスタンブロット法による解析を行った。その結果、olaparibとブロモドメイン阻害剤の併用によりアポトーシスを検出することができた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
令和元年度は、ヒトTNBC細胞に有効なolaparib併用療法の検討を行った。ヒトTNBC細胞株に各種抗癌剤とolaparibを同時に加え、48時間後に細胞を回収し、アポトーシスを調べた。これまでに25種類の抗癌剤を用いて調べた結果、olaparibとブロモドメイン阻害剤の併用により、アポトーシスを検出することができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和2年度は、olaparib感受性を亢進するターゲットタンパク質を同定するため、以下の実験を行う予定である。
１）miRNA標的予測サイトTargetScan（http://www.targetscan.org）や、すでに報告されている論文を調べ、miR-X、miR-Y、miR-Zのターゲットを検索する。
２）ヒトTNBC細胞株にmiR-X、miR-Y、miR-Zを過剰発現させた後、上記１）で検索したターゲットタンパク質の発現量が減少しているかどうか、ウェスタンブロット法により確認する。
３）上記２）で同定したターゲットタンパク質をsiRNAにより発現抑制し、olaparibに対して高感受性を示すかどうか確認する。
４）上記２）、３）の実験で同定したターゲットタンパク質について、阻害剤の有無を調べ、阻害剤が使用できる場合は、単独またはolaparibを併用し、ヒトTNBC細胞株に対する感受性を検討する。
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