| 研究実績の概要 |
保有する膵癌細胞株8株でYAP/TAZの発現状態をwestern blotting法で確認したところ、肝癌細胞株同様にTAZ優位（TAZ>YAP）の発現パターンを8株中7株で呈して
いた。AsPC-1細胞株ではYAP=TAZ程度の発現状態であった。Smad4の発現についてもwestern blotting法で確認したところ、Smad4発現あり（MIAPaca2, PANC-1,
PK59, PK8）とSmad4発現なし（AsPC-1, KLM-1, S2-VP10, S2-013）の株があり、以降のTGF-β添加実験にはAsPC-1, KLM-1, MIAPaca2, PANC-1, PK59を用いることとした。TGF-β添加量の設定を行うために、TGF-βを5ng/mL, 10ng/mL, 15ng/mLで添加し、Smadシグナルの活性化をphospho-Smad3で確認し添加量をTGF-β1の投与量を15ng/mLに設定した。TGF-β1を膵癌細胞に投与することにより、MIAPaCa-2細胞株では、YAP/TAZのtotal発現量は変わらなかったが、リン酸化YAP/TAZの発現低下を認めHippo-pathwayの不活化ひいてはYAP/TAZの活性化ならびにEMTの促進を同定した。膵癌微小環境において、cancer-associated fibroblastが癌進展に重要な役割を有することが注目されており、膵癌切除組織よりisolateしたCAFならびに非癌部よりnormal fibroblastを樹立し、CAFとnormal fibroblastでTGF beta1, 2, 3のmRNA levelをreal time PCRで検討した。CAFではnormal fibroblastに比べて高いTGF beta1, 2, 3の発現を認めた。CAF由来のTGFbetaが膵癌進展およびHippo-pathwayの不活化に関与するメカニズムについて検討を進めている。
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