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2019 年度 実施状況報告書

消化器癌リンパ節転移における細胞間接着因子Claudinの機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 18K08676
研究機関滋賀医科大学

研究代表者

三宅 亨  滋賀医科大学, 医学部, 講師 (70581924)

研究分担者 谷 眞至  滋賀医科大学, 医学部, 教授 (60236677)
生田 大二  滋賀医科大学, 医学部, 客員助教 (00581935)
徳田 彩  滋賀医科大学, 医学部, 医員 (80814392)
研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2021-03-31
キーワードClaudin / CT26
研究実績の概要

Claudinは接着因子であり、細胞間結合に重要な役割を果たす。本研究では癌リンパ節転移におけるClaudinの機能解析をおこなっている。 マウス大腸癌細胞株であるCT26を用いて、Claudin9の強制発現株を作成した。Claudin9の発現が上昇していることをqPCRで確認し、強制発現株ではCT26の親株と比較して約5000倍のmRNAの発現の上昇があることを確認した。また、western blottingを用いて、CT26でのClaudin9強制発現株においてClaudin9蛋白が高発現であることを確認した。次に、Claudin9の強制発現細胞株と親株であるCT26を用いて細胞増殖についてCCK-8を用いて検討した。CT26とClaudin9の強制発現細胞株では細胞増殖に有意な差を認めなかった。これより、in vitroにおいてはClaudin9はCT26の細胞増殖には影響しないと考えられた。また、EMT関連遺伝子についてqPCRを用いて検討したところ、Claudin9の強制発現細胞株ではsnai1とVimentinの発現が低 下していた。
確立した遺伝子改変細胞株をマウスへ静脈注射にて移植を行い、肺転移腫瘍の面積で検討すると肺転移がClaudin9高発現細胞株で増加していた。また、肺の重量も増加しており、肺転移の増加と矛盾しない結果であると考えられた。現在、薄切を作成し、染色にて癌微小環境を含めた検討を行う予定である。また、肺組織からRNAを抽出し、マイクロアレイにて発現を検討する予定である。
また、臨床検体を用いて大腸癌の原発巣におけるClaudin9の発現について検討を行うため、薄切スライドを作成し、免疫染色をおこなっている。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

臨床検体を用いた免疫染色でClaudin9の染色は用意ではなく、さまざまな条件検討が必要であったため。

今後の研究の推進方策

今後はin vivoにおけるClaudin9強制発現株の肺転移からマイクロアレイを行い、機序解析を行う。
臨床検体におけるClaudin9の発現と予後との関連について検討をおこなう。

次年度使用額が生じた理由

細胞株の樹立など条件検討に時間を用し、抗体などの実験物品の必要性が遅れたため。

  • 研究成果

    (1件)

すべて 2019

すべて 学会発表 (1件)

  • [学会発表] 大腸癌転移における Claudin9 発現の機能解析2019

    • 著者名/発表者名
      三宅 亨
    • 学会等名
      制癌剤適応研究会

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公開日: 2021-01-27  

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