| 研究実績の概要 |
炎症性疼痛モデルにおいて疼痛処置後の脳および脊髄からのミクログリアの単離採取を試みた。単離の方法として、フローサイトメトリー（FACS）を用いて抗CD45抗体および抗CD11b抗体による分離精製を行ったが単離率、生存率が共に低かった。そのため、免疫組織化学的解析にてc-Fos発現が有意であった梨状皮質領域から分離した細胞群をその後の解析に使用することが困難であった。そこで、大脳皮質および脊髄組織全体から細胞を分散し、遠心操作によるデブリの除去を行なった上で細胞の単離を行った。
分離精製した細胞群における遺伝子発現をqPCRによって行った。ミクログリアの活性化マーカーおよびサイトカイン、ケモカインの発現を解析した結果、大脳皮質および脊髄由来のミクログリアにおいてTNF, IL1b, IL6, CX3CL1, CX3Cr1, CXCL1, CXCL5, CXCL2, IL18, P2X4, TLR4, CSF1, Sirt2の遺伝子発現はいずれもコントロール群と疼痛処置群で有意な差は認めなかった。
一方、成熟期マウスにおける炎症性疼痛モデルの急性期には大脳皮質体性感覚野における神経細胞のカルシウムチャネルα1(Cav2.1, Cav2.2)の発現が増加していた。また神経細胞の活性化における同調性が増加していることが明らかとなったことから、若年期の疼痛刺激が及ぼす長期的な影響についても、グリア細胞と合わせて神経細胞の動態に着目して解析する必要があると思われる。
|
