| 研究課題/領域番号 |
18K08864
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
花崎 元彦 国際医療福祉大学, 医学部, 教授 (60379790)
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| 研究分担者 |
千葉 義彦 星薬科大学, 薬学部, 教授 (00287848)
倉橋 清泰 国際医療福祉大学, 医学部, 主任教授 (50234539)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 虚血再潅流傷害 / 肺移植 / 麻酔薬 / マイクロRNA / RhoA/Rho-kinase / 非翻訳RNA / 標的分子種 |
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| 研究実績の概要 |
本研究計画では2020年度までに、肺虚血再潅流傷害モデルラットに認められる気管支平滑筋過敏性発現におけるRhoA-ROCK系の関与を証明するとともに、その発現制御についてmicroRNAあるいはlong non-coding RNA (lncRNA)レベルまで検討を行い、RhoA-ROCK系が亢進するメカニズムを明らかにすること、さらに気管支 平滑筋過敏性発現に対するROCK阻害薬前処置の効果について検討を行い、肺移植術後の呼吸管理におけるROCK阻害薬の有用性について予測することを目標としている。
2019年度は前年度に引き続きラット肺虚血再潅流モデルの作成および各種サンプルの調製を行った。Wistar雄性ラットをペントバルビタールで麻酔、気管切開、人工呼吸のもと開胸し左肺門部をクランプして30分間の虚血状態とし、後にクランプ開放により再潅流とした。再潅流時間は30分から3時間まで、条件を変化させながら肺および他臓器の状態をチェックした。採取した左肺よりタンパク質サンプルあるいはtotal RNAサンプル調製用として、最適条件にて保存した。
再潅流時間について、肺組織の肉眼的な観察を行いながら、ラットの全身状態（循環動態、動脈血液ガス分析による酸素化能）が保たれるための至適時間を決定する作業を繰り返した。最も長い3時間は循環動態や酸素化能の著しい悪化を来すことが多く主に30分、1時間を用いてサンプル採取した。採取した一部のサンプルを用いてWestern blot法、リアルタイムPCR法のスタートアップを行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
順調だが、下記に述べる通り、若干の遅れを生じている。
初年度である2018年度に肺虚血再潅流モデルの作成を開始したが、研究代表者である花崎が星薬科大学における研究環境を構築するために多少の時間を要した。その後は2019年度にかけて順調に進行したが、2018年度に生じた遅れがそのまま残っている形である。また2020年1月以降は新型コロナウィルス感染症の影響により研究室を含む大学施設の使用が次第に困難となったことでサンプル採取、Western blot法、リアルタイムPCR法など全ての行程に遅れを生じた。現在は大学施設が閉鎖されており研究活動は中断している。
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| 今後の研究の推進方策 |
大学施設の使用が再開され次第、肺虚血再潅流モデルラットから肺のサンプル採取、Western blot法、リアルタイムPCR法を再開させる。その後マイクロアレイ解析などにより肺虚血再潅流傷害による気道過敏性亢進に関与する遺伝子を同定する。さらに、より詳細なメカニズム解明を目的に、培養細胞を用いたin vitroモデルの構築についても順次進めていく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
概ね順調に進んだが、肺虚血再潅流モデルラットからのサンプル採取に必要な設備および消耗品は2018年度に準備を済ませている。2019年度はこれら既に購入した物品を用いての実験を繰り返した。またWestern blot法、リアルタイムPCR法についても同様である。これらにより次年度使用額が生じた。
(使用計画)
肺虚血再潅流傷害モデルから得られた標本を用い、ウェスタンブロットやリアルタイムPCRなど生化学的解析を続けるため消耗品(試薬、抗体)に用いる。
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