改変ノッチ受容体導入T細胞による中枢神経系原発悪性リンパ腫抑制効果の検討

2020 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18K09000
• 研究機関: 横浜市立大学
• 研究代表者: 西 真由子 横浜市立大学, 医学部, 助教 (90635343)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 脳腫瘍 / 悪性リンパ腫 / ウイルス / 腫瘍免疫

研究実績の概要

本研究課題では、中枢神経原発リンパ腫（PCNSL: primary central nervous system lymphoma)に対する治療法として、腫瘍溶解性ウイルス(oncolytic virus: OLV)および合成ノッチ（synNotch）を活用した新たな免疫療法の開発に向けた基盤的研究を実施している。本年度は、患者由来PCNSL細胞株の特性解析、OLVとして使用しているニューカッスル病ウイルス（Newcastle disease virus: NDV）のHN抗原に対するモノクローナル抗体の性状解析とFab 領域のクローニング、ならびに、抗NDV-HN一本鎖抗体（ScFv）を搭載したsynNotch細胞の構築を行った。 ビトリゲルを使用した3次元培養系を用いて樹立したPCNSLを増幅し、免疫不全マウスに移植したところ、腫瘍細胞は脳血管周囲において顕著に浸潤・増殖しており、原発巣における腫瘍の増殖様式や組織型とほぼ一致していた。PCNSLのNDVに対する感染感受性およびウイルス抗原の発現を、作製したモノクローナル抗体を用いたフローサイトメーターで解析したところ、約７０%の患者由来PCNSL細胞の細胞表面にHN抗原が発現していることが明らかになった。次に、NDV-HNを認識するsynNotch遺伝子カセットをT細胞株であるJurkat細胞に定常的に発現させ、NDV感染PCNSL細胞と共培養すると、synNotchが感染PCNSLを感知し、人工転写因子Gal4-Vp64が核内に移動してレポーター遺伝子の発現が誘導された。PCNSLの細胞表面マーカーであるCD19に対するキメラ抗原受容体（CAR）遺伝子をGal4 DNA-binding domain (DBD)の下流のカセットに導入し、synNotchの活性化により誘導されるかどうかについて現在確認中である。

研究成果

• [雑誌論文] Zika virus protease induces caspase-independent pyroptotic cell death by directly cleaving gasdermin D (2021)
  • 著者名/発表者名: Yamaoka Y, Matsunaga S, Jeremiah SS, Nishi M, Miyakawa K, Morita T, Khatun H, Shimizu H, Okabe N, Kimura H, Hasegawa H, Ryo A.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 534 ページ: 666-671
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2020.11.023.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Carbonic anhydrase 13 suppresses bone metastasis in breast cancer (2021)
  • 著者名/発表者名: Yogosawa S, Nakayama J, Nishi M, Ryo A, Yoshida K.
  • 雑誌名: Cancer Treat Res Commun. 巻: 27 ページ: 100332.
  • DOI: 10.1016/j.ctarc.2021.100332.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rapid quantitative screening assay for SARS-CoV-2 neutralizing antibodies using HiBiT-tagged virus-like particles (2021)
  • 著者名/発表者名: Miyakawa K, Jeremiah SS, Ohtake N, Matsunaga S, Yamaoka Y, Nishi M, Morita T, Saji R, Nishii M, Kimura H, Hasegawa H, Takeuchi I, Ryo A.
  • 雑誌名: J Mol Cell Biol. 巻: 12 ページ: 987-990
  • DOI: 10.1093/jmcb/mjaa047.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Development of Monoclonal Antibodies and Antigen-Capture ELISA for Human Parechovirus Type 3. (2020)
  • 著者名/発表者名: Goto K, Yamaoka Y, Khatun H, Miyakawa K, Nishi M, Nagata N, Yanaoka T, Kimura H, Ryo A.
  • 雑誌名: Microorganisms. 巻: 8 ページ: 1437.
  • DOI: 10.3390/microorganisms8091437
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A Hyperactive RelA/p65-Hexokinase 2 Signaling Axis Drives Primary Central Nervous System Lymphoma (2020)
  • 著者名/発表者名: Tateishi K, Miyake Y, Kawazu M, Sasaki N, Nakamura T, Sasame J, Yoshii Y, Ueno T, Miyake A, Watanabe J, Matsushita Y, Shiba N, Udaka N, Ohki K, Fink AL, Tummala SS, Natsumeda M, Ikegaya N, Nishi M, et al.
  • 雑誌名: Cancer Res. 巻: 80 ページ: 5330-5343
  • DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-20-2425.
  • 査読あり / オープンアクセス