| 研究課題/領域番号 |
18K09361
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| 研究機関 | 近畿大学 |
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研究代表者 |
家根 旦有 近畿大学, 奈良病院, 教授 (40220199)
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| 研究分担者 |
西尾 和人 近畿大学, 医学部, 教授 (10208134)
坂井 和子 近畿大学, 医学部, 講師 (20580559)
藤井 正人 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター), その他部局等, 研究員 (70129633)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 中咽頭癌 / HPV / 次世代シーケンサー / 遺伝子解析 |
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| 研究実績の概要 |
中咽頭癌はHPV感染の有無によって予後が異なることが報告され、2017年のTNM分類の改定ではHPV関連中咽頭癌は独立した項目として分類されることになった。HPV関連中咽頭癌は予後が良好であることから低侵襲治療を開発する目的で、「中咽頭扁平上皮がんに対する集学的治療の効果とヒト乳頭腫ウイルス感染との相関に関するバイオマーカー研究」のプロトコールを作成し、頭頸部癌基礎研究会の会員に多施設共同研究の参加を募った。その結果、14施設からStageⅢ/Ⅳ中咽頭癌85例のサンプルを回収し、近畿大学医学部ゲノム生物学教室でゲノム解析を行った。
採取されたサンプルから遺伝子解析が可能であった症例は80例であった。HPV検査として、PCRによるHPV-DNA検査、ハイブリッドキャプチャーII法、p16免疫染色法のいずれかに陽性であった症例をHPV陽性とみなした。その結果HPV陽性は56例（70%）、HPV陰性は24例（30%）であった。HPVのgenotypeはHPV16型48例（87.5%）、HPV35型3例（5.4%）、HPV58型2例（3.6%）、HPV31型1例（1.8%）、HPV33型1例（1.8%）であった。
ゲノム解析の方法は次世代シーケンサーであるIonProtonシステムを用い、体細胞遺伝子の解析にはIon AmpliSeq Cancer Hotspot Panel v2を用いて行なった。遺伝子解析の結果は、HPV陽性ではPIK3CAの遺伝子変異が最も多く、56 例中12例（21.4%）、次いでFGFR3 5例（8.9%）、PTEN 4例（7.1%）であった。HPV陰性では24例中p5311例（45.8%）、次いでPIK3CA 2例（8.3%）であった。飲酒・喫煙歴の無い症例は9例で、全例がHPV陽性でPIK3CA変異は3例（33.3%）であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
頭頸部癌基礎研究会の14施設からの参加を得たことは十分な成果であった。本研究の基礎となる臨床研究は、2014年5月から2016年3月の期間に研究者分担者の藤井正人が行った「中咽頭扁平上皮癌に対する集学的治療とHPV感染に関する臨床研究」に付随するものであり、その研究には全国18施設が参加し、92例のサンプルが集められた。その内、14施設が本研究に参加し85例のサンプルが集められたが、遺伝子解析が可能であった症例は80例で、詳細な臨床データを持つサンプルを80例集められたことは大きな成果であった。収集されたサンプルは既に研究者分担者である藤井正人の研究施設で各種のHPV検査が行われており、HPVの陽性の判定が確定されている。また凍結組織検体から抽出されたDNAは東京医療センターで厳密な管理の下で保管されており、そのDNAの質は確認されていた。そのDNAを近畿大学ゲノム生物学研究室に移送し、遺伝子解析が行うことができたことは、本研究の予定通りの進捗状況であると考える。また予後調査は研究者分担者である藤井正人が本研究における第３回目の調査を2018年4月30日付で各施設に依頼し、最終の予後調査日は2019年4月末であった。80例全例の3回目予後調査を完了できたことは大きな成果であった。
3回目の予後調査を行った結果は、HPV(+)の3年全生存率は90.5%、HPV(-)の３年全生存率は40.9%で、HPV(+)の全生存率はHPV(-)の全生存率に比べて明らかに良好であった。HPV(+) においてPIK3CAの変異の有無による全生存率の差は認められなかった。
現在論文の作成中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和5年度の研究内容は当初の研究目標である中咽頭癌の遺伝子解析と予後調査であり、本研究の第３回目の予後調査を2018年4月から開始し2019年4月末に終了した。予後調査は登録施設に依頼し、回収された症例は80例で回収率は100％であった。
本研究ではすでに次世代シーケンサーのIonProtonシステムを用い、Ion AmpliSeq Cancer Hotspot Panel v2を用いた方法で、50遺伝子、2,790ヶ所の変異を調査しすでに80例の遺伝子解析は終了している。さらに網羅的な遺伝子解析を行うには検索遺伝子の個数が４倍以上のパネルを用いることが必要となるが、高価であるため症例を絞っての解析となる。今回の遺伝子解析の結果から、HPV陽性中咽頭癌とHPV陰性中咽頭癌のそれぞれで特徴的な遺伝子変異を認めた症例はさらに詳細な遺伝子解析を行う必要があると考えている。特にHPV陽性中咽頭癌でのPIK3CA遺伝子変異症例、 HPV陰性中咽頭癌におけるp53遺伝子変異症例はさらに詳細な遺伝子解析を行う必要がある。また対象症例の予後を調査し、本来は予後が良好と考えられているHPV陽性中咽頭癌の予後不良例、反対にHPV陰性中咽頭癌の予後良好例の遺伝子背景を検索することは、中咽頭癌に対する低侵襲治療開発の礎になるものと考えている。
令和5年度は登録症例の予後を詳細に分析し、その予後に影響する遺伝子変異や患者背景との関連を明らかにし、論文作成を行うことを目標としている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次世代シーケンサーを用いた遺伝子解析では計画通り結果が得られたが、予後調査の集計に時間がかかったことで最終的なHPV感染の有無と予後と解析が遅れ、令和4年度以内に結論を出すことは困難で次年度に延長することになった。令和5年度にはHPVの遺伝子解析と予後調査の結果を詳細に解析し、HPV解析に基づく中咽頭癌の適切な治療方法を提示し、論文として発表することを目指す。令和5年度にはHPV関連の情報を得るために関連学会へ参加し、英語論文作成のための資金が必要と考えている。
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