| 研究課題/領域番号 |
18K09387
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
飯塚 崇 順天堂大学, 医学部, 非常勤助教 (40372932)
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| 研究分担者 |
神谷 和作 順天堂大学, 医学部, 准教授 (10374159)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 遺伝子難聴 / アデノ随伴ウィルスベクター / 蝸牛ギャップ結合 |
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| 研究実績の概要 |
遺伝性難聴は1600出生に一人と高頻度に発生するが、その根本的治療法はなく次世代の治療法開発が期待されている。遺伝性難聴の原因遺伝子として世界中で圧倒的に検出頻度が高いのがギャップ結合タンパク質Connexin (CX) 26をコードするGJB2遺伝子である。
申請者はアデノ随伴ウィルス（AAV）ベクターを用いたCX26欠損マウス内耳への遺伝子治療実験により、CX26欠損マウスにおける高度難聴を優位に回復させることに初めて成功した。しかし、この実験において聴力回復に成功したマウスは生後0日齢であり、ヒトの内耳では胎生期に相当する。当時の方法による遺伝子治療法では成熟マウスの聴力回復には至らなかった。本研究ではベクター投与法を改良することによりヒト臨床応用への対象として現実的である成熟マウスでの聴力回復を実現させる新たな遺伝子導入法の開発を目指す。
これまでの研究ではAAVの蝸牛ギャップ結合形成細胞への最適血清型を同定するため各種AAV血清型にGJB2遺伝子を搭載したベクターを作成した。最適な血清型の配列からカプシド領域の改変を進め、改良型のAAVベクターを開発した。蝸牛器官培養において、従来型血清型に比べて導入効率および感染指向性に大きな相違が見られ、ギャップ結合形成細胞への感染効率が向上した。さらに蝸牛器官培養にて既存の血清型AAVでのin vitro感染を行った。これにより標的細胞への感染効率の良いベクターを選抜した。蝸牛器官培養での結果を元にAAVベクターの配列を比較し標的細胞であるCX26ギャップ結合形成細胞への効率の良いベクターを選抜した。AAVベクターをマウス蝸牛に効率よく導入するための投与法の検討を行い、後半規管より一定量のウィルス液で蝸牛外リンパ液を貫流することにより、CX26欠損モデルマウスの蝸牛細胞へ高効率にCX26遺伝子を導入させることに成功した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
実験動物施設の工事が完了し、実験動物の手術設備、および聴力解析システムの運用を最適化させたより実験動物の数を確保し遺伝子導入実験および聴力解析実験を安定的に運用させることができたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
予定していた対象マウスの繁殖を再加速させ、成熟マウスにおいて血清型AAVを用いた聴力回復実験において内耳投与手術のさらなる検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
コロナ禍により実験動物作製に遅れが生じ、予定していた対象マウスの繁殖が進まず、それに伴い消耗品の消費が少なくなった。今後は関連する消耗品の購入に使用する予定である。
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