研究課題
マウス実験的脈絡膜新生血管(Choroidal Neovascularization: CNV)におけるHigh-mobility group protein B1(HMGB1)の関与について検証した。1.マウス実験的CNVにおけるHMGB1の過剰発現の確認。C57BL6Jマウスに散瞳剤を点眼し、麻酔を行った後、片眼の眼底にレーザーを行い、CNVを作成した。その反対眼はレーザーを施行せず、対照眼とした。レーザー施行後、12時間、1日、3日、7日後に眼球摘出し、網膜と網膜色素上皮-脈絡膜複合体に分離し、それぞれのサンプルを使ってELISA法あるいはウェスタンブロッテイング法でHMGB1の発現を対照と比較し、過剰に発現していることを確認した。2.抗HMGB1抗体の硝子体内注射によるマウス実験的CNVの抑制効果の検証。マウスの両眼に実験的CNVを作成後、片眼に抗HMGB1抗体を硝子体内注射し、反対眼にアイソタイプの抗IgG抗体を同様に注射し、対照とした。レーザーと硝子体注射施行後6日目でフルオレセイン蛍光眼底造影検査(FA)を行い、CNVの活動性を対照群と比較した。抗HMGB1抗体を投与したものでは、有意にFAでCNVからの蛍光漏出が抑制されていた。また、CNVにおける白血球の動態をアクリジンオレンジ蛍光染色法を用いて観察し比較した。抗HMGB1抗体を投与したものでは、有意にCNV周囲に集積する白血球数が抑制された。さらには、レーザー施行7日後に眼球摘出し、網膜色素上皮-脈絡膜複合体のフラットマウントを作成し、FITCで標識されたレクチンでCNVを染色し、共焦点顕微鏡でCNVの画像を作成し、ImageJソフトウェアでCNVの体積を測定し対照と比較した。抗HMGB1抗体を投与したものでは、有意にCNVの活動性とサイズが抑制されていることが確認できた。
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