口腔癌擦過細胞のマイクロRNA解析による後発頸部リンパ節転移予測マーカーの確立

2019 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 18K09773
• 研究機関: 琉球大学
• 研究代表者: 新崎 章 琉球大学, 医学部, 非常勤講師 (00175960)
• 研究分担者: 海川 正人 琉球大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (00325838) ; 丸山 哲昇 琉球大学, 熱帯生物圏研究センター, 協力研究員 (60751493)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• キーワード: 口腔癌 / マイクロRNA / 後発頸部リンパ節転移 / 予測マーカー / 口腔擦過細胞診

研究実績の概要

本研究の目的は、口腔癌の術後にみられ、生命予後に大きく左右する 後発頸部リンパ節転移(LNM) の機序解明および新診断法の確立である。我々の前研究で、LNMとの関連が示唆されたマイクロRNA (miR)196a-5pとその標的遺伝子に着目し、以下の3つの試験を行い、エビデンスのあるLNM予測マーカーとその解析手法の確立を目指す。即ち、(A) Brush biopsy (BB)の手技で回収した口腔擦過細胞 (BB細胞) を用いた遺伝子発現解析法の確立。(B) miR-196a-5p のDLNM制御機構の解明。(C) 口腔擦過細胞を用いた口腔癌遺伝子発現診断法の確立。同miR の口腔癌に与える影響を解明することで、エビデンスのあるDLNM予測マーカーとその解析手技の確立を目指したい。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

2019年度は下記の試験を行った。
これまでに得られた結果だけではin vivo試験への移行に不安があるため、in vitroでの解析精度をさらに高めるべく、エレクトロポレーション法、フローサイトメトリー法、増殖能アッセイ（EdU assay）、アポトーシスアッセイならびにデュアルルシフェラーゼレポーターアッセイを試験計画に加えて、マイクロRNAとその選定遺伝子を評価した。レポーターアッセイの習得と複数の手法の最適化に難渋したが、適切なプラスミド構築、挿入、配列確認を行うことができた。また、マイクロアレイ法により興味深い結果が得られた。次年度にin vivo解析を予定しているが、総合的に本研究の進行はやや遅れているため、併行して臨床サンプルを用いた解析も進める。

今後の研究の推進方策

上に記載している。

次年度使用額が生じた理由

令和元年度のin vitro試験のため試薬を購入予定だったが、一部実験が滞っており残金が生じた。令和2年度に当該実験を行う。

研究成果

• [雑誌論文] Oral health behavior of children and guardians’ beliefs about children’s dental caries in Vientiane, Lao People’s Democratic Republic (Lao PDR) (2019)
  • 著者名/発表者名: Somphone Phanthavong, Daisuke Nonaka, Thongsavanh Phonaphone, Kyoko Kanda, Phouphachanh Sombouaphan, Norie Wake, Sangvane Sayavong, Toshiyuki Nakasone, Khampe Phongsavath, Akira Arasaki
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 14 ページ: e0211257
  • DOI: https://doi.org/ 10.1371/journal.pone.0211257
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Thymoma appearing 9 years after resection of lip squamous cell carcinoma: a case report of triple primary tumors and literature review. (2019)
  • 著者名/発表者名: Maruyama N, Sasaki T, Arasaki A, et al.
  • 雑誌名: Oncology Letters 巻: 18 ページ: 2777-2788
  • DOI: 10.3892/ol.2019.10675
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Early computed tomography for detection of internal jugular vein thrombosis after neck dissection and/or reconstruction surgery for head and neck cancer patients. (2019)
  • 著者名/発表者名: Maruyama N, Shimizu Y, Nakaema M, Nishihara K, Nakasone T, Matsumoto H, Kusada T, Nimura F, Matayoshi A, Maruyama T, Yoshimi N, Arasaki A.
  • 雑誌名: International Journal of Clinical and Experimental Medicine 巻: 12 ページ: 6258-6266
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] K1 gene transformation activities in AIDS-related and classic type Kaposi’s sarcoma: Correlation with clinical presentation (2019)
  • 著者名/発表者名: Ayumi Tamanaha-Nakasone, Karina Uehara, Yasuka Tanabe, Haruna Ishikawa, Natsuko Yamakawa, Zensei Toyoda, Kiyoto Kurima, Shinichiro Kina, Masayuki Tsuneki, Yuko Okubo, Sayaka Yamaguchi, Daisuke Utsumi, Kenzo Takahashi, Hirofumi Arakawa, Akira Arasaki, Takao Kinjo.
  • 雑誌名: Scientific reports 巻: 9 ページ: 6416
  • DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-019-42763-0
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] 進行舌癌治療後に発症した治療関連骨髄異形成症候群の1例. (2019)
  • 著者名/発表者名: 仁村文和, 丸山哲昇, 村橋信, 丸山修幸, 新崎章.
  • 雑誌名: 日本口腔腫瘍学会誌 巻: 31 ページ: 91-96
  • DOI: https://doi.org/10.5843/jsot.31.91
  • 査読あり / オープンアクセス