| 研究課題/領域番号 |
18K09825
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
高岡 一樹 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (60373122)
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| 研究分担者 |
山根木 康嗣 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (00434944)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 破骨細胞 / TGF-β / 老化 |
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| 研究実績の概要 |
マクロファージ系破骨前駆細胞RAW264.7細胞（継代数3～8）をTGF-β1、SB431542（TGF-β1型受容体キナーゼ活性阻害剤）およびRANKLによって処理した。破骨細胞様細胞への分化傾向はTGF-β1+RANKL処理が最も高く、SB431542処理により分化は抑制された。24時間作用後のmigration assayでは、TGF-β1処理で細胞運動能が亢進し、SB431542処理により抑制されたが、72時間作用後ではTGF-β1処理で細胞運動能が低下し、SB431542処理により亢進した。24時間作用後のadhesion assayでは、TGF-β1作用群は接着能が低下し、その傾向はRAKLを併用作用させても同様であった。72時間作用後では、TGF-β1作用群の接着能の低下は回復傾向を示した。細胞形態はTGF-β1を24時間作用させると円形から紡錘形や多角形に変化したが、72時間作用後は再度、円形に回復した。RAKL併用作用により多核の破骨細胞様細胞を確認できた。また、24時間作用後ではTGF-β1処理によりRhoA，Racタンパクの発現は上昇したが、72時間作用後ではTGF-β1処理群のRhoA、Racタンパクの発現は減少した。現在、継代数15～20のRAW264.7細胞を用いて上記と同様の実験を行い比較検討している。また、細胞培養上清からエクソソームを回収し解析を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
老化マーカーの検索を行っているものの、エクソソームの単離および解析ができていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
骨芽前駆細胞株MC3T3-E1細胞を用いて継代数における分化への影響を検討する。3代までのMC3T3-E1細胞および15代まで継代した両細胞に、それぞれ骨芽前駆細胞分化因子（アスコルビン酸、β-グリセロリン酸、デキサメタゾン）を添加し培養を行い、各細胞の分化能をALP 活性測定にて検討する。エクソソーム単離キットを用いて細胞培養上清からエクソソームを回収する。回収したエクソソームをmiRNA解析し、SASP因子（iNOS、HIF、TGF-β、IL-6、IL-8）がエクソソームとして分泌されているかどうかを確認する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
対照群のエクソソーム のmiRNA解析を行ったところ、エクソソーム の単離ができていなかった。引き続き行う予定であった各種細胞のエクソソーム 単離、解析時に予定していた単離キットやmiRNA解析の支出がなく、次年度の使用が生じた。次年度に解析を行う予定であり、必要な消耗品等の購入に使用を計画している。
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