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2020 年度 実施状況報告書

変形性顎関節症の軟骨破壊に対するAngptl2の作用機序解明と新規治療法への応用

研究課題

研究課題/領域番号 18K09833
研究機関広島大学

研究代表者

麻川 由起 (丹根由起)  広島大学, 医系科学研究科(歯), 助教 (50526241)

研究分担者 谷本 幸太郎  広島大学, 医系科学研究科(歯), 教授 (20322240)
國松 亮  広島大学, 病院(歯), 講師 (40580915)
廣瀬 尚人  広島大学, 医系科学研究科(歯), 助教 (50611935)
粟田 哲也  広島大学, 医系科学研究科(歯), 助教 (90758179)
研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2022-03-31
キーワード変形性顎関節症 / Angptl2
研究実績の概要

本年度では、まずAngptl2が軟骨基質代謝因子発現を上昇させるメカニズムを明らかにするために、CRISPR-dCas9 活性化プラズミドを用いて Angptl2 の活性化を行った後、経時的に蛋白を精製し、NF-kB および MAP キナーゼ(ERK, JNK, p38)活性の変化を Western blot 法にて解析を行った。Angptl2活性化10分後より3つのMAPK全てのリン酸化が亢進し、10分後よりAktのリン酸化が誘導された。さらに、20分以降NF-kBのリン酸化は亢進した。
次に、インテグリンa5B1のAngptl2経路への関与を検討するために、インテグリンa5B1中和抗体による炎症関連因子への影響についてreal-time PCR解析およびwestern blot解析を行った。Integrin a5B1中和抗体添加によって、ANGPTL2活性化後のANGPTL2、 IL-1B、TNF-a、 COX-2、 ADAMTS-5、 MMP-3および MMP-13の遺伝子発現は抑制された。また、Integrin a5B1中和抗体添加によって、ANGPTL2、COX-2、MMP-13のタンパク質発現を抑制することが明らかとなった。さらに、インテグリンa5B1中和抗体によるシグナリング経路への影響を検討したところ、Integrina5B1中和抗体添加により、ANGPTL2添加によって亢進したERK、JNK、Aktのリン酸化は有意に抑制され、p38、NF-kBのリン酸化はわずかに抑制された。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

Angptl2の発現の軟骨基質代謝因子を亢進するメカニズムをin vitro実験系での解明を行うことができているため、順調に進展していると判断した。

今後の研究の推進方策

今後の研究では、6週齢 Wistar系雄性ラットに10日目より、一日一時間 30 mmの強制開口を20 日間行い、TMJ-OA モデルを作製する。これまで、我々の研究室で行ってきた方法であり、TMJ-OAモデルの作製は確立されている。リコンビナントAngptl2を顎関節内に注入し、免疫組織学的に検討を行う予定である。

次年度使用額が生じた理由

研究を中断している期間があり、研究内容の遅れが生じていた。今年度では、in vitro実験系でのAngptl2のシグナリング経路について解明を行った。研究期間を延長し、次年度では、6週齢 Wistar系雄性ラットでのTMJ-OA モデルを作製する。リコンビナントAngptl2を顎関節内に注入し、免疫組織学的に検討を行う予定であり、ラットの購入費用や動物実験用の薬品や試薬、論文投稿費用に使用する予定である。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2020

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (4件) (うち国際学会 1件)

  • [雑誌論文] FAK inhibition protects condylar cartilage under excessive mechanical stress.2020

    • 著者名/発表者名
      Yanoshita M, Hirose N, Sumi C, Takano M, Nishiyama S, Tsuboi E, Onishi A, Yamauchi Y, Asakawa Y, Ryo K, Tanimoto K.
    • 雑誌名

      Oral Dis.

      巻: 26(8) ページ: 1736-1746

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Protective effects of cilengitide on inflammation in chondrocytes under excessive mechanical stress2020

    • 著者名/発表者名
      Hirose N, Okamoto Y, Yanoshita M, Asakawa Y, Sumi C, Takano M, Nishiyama S, Su SC, Mitsuyoshi T, Kunimatsu R, Tanne K, Tanimoto K.
    • 雑誌名

      Cell Biol Int.

      巻: 44(4) ページ: 966-974

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] 広島大学矯正歯科における過去5年間の顎関節症患者に関する統計調査2020

    • 著者名/発表者名
      大西 梓、廣瀬尚人、麻川 由起、粟田 哲也、矢野下 真、高野 真実、山内 優佳、西山 沙由里、壷井 英里、久保 尚毅、谷本幸太郎
    • 学会等名
      第33回日本顎関節学会学術大会
  • [学会発表] Role of Semaphorin3A in endochondral ossification of mandibular condyle2020

    • 著者名/発表者名
      Eri Tsuboi, Yuki Asakawa, Naoto Hirose, Makoto Yanoshita, Mami Takano, Sayuri Nishiyama, Naoki Kubo, Azusa Onishi, Yuka Yamauchi, Kotaro Tanimoto
    • 学会等名
      第9回国際矯正歯科会議世界大会・第12回アジア太平洋矯正歯科学会・第79回日本矯正歯科学会学術大会
    • 国際学会
  • [学会発表] 軟骨に対する過度な機械的負荷時のFAK-MAPKsカスケードによる炎症反応メカニズムの解明2020

    • 著者名/発表者名
      矢野下 真、廣瀬尚人、高野真実、西山沙由里、壷井英里、大西 梓、山内 優佳、久保尚毅、麻川由起、谷本幸太郎
    • 学会等名
      第33回日本顎関節学会学術大会
  • [学会発表] セマフォリン3Aは軟骨において過度な機械的負荷による炎症発現を抑制する2020

    • 著者名/発表者名
      廣瀬尚人, 矢野下 真, 高野真実, 西山沙由里, 大西 梓, 久保 尚毅、麻川 由起、谷本幸太郎
    • 学会等名
      第33回日本顎関節学会学術大会

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公開日: 2021-12-27  

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