| 研究課題/領域番号 |
18K09839
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
稲田 絵美 鹿児島大学, 医歯学域鹿児島大学病院, 講師 (30448568)
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| 研究分担者 |
佐藤 正宏 鹿児島大学, 総合科学域総合研究学系, 教授 (30287099)
齊藤 一誠 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (90404540)
野口 洋文 琉球大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (50378733)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 遺伝子工学的手法 / 乳歯歯髄幹細胞 / 体性幹細胞 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、乳歯歯髄細胞（HDDPC）に含まれる体性幹細胞（somatic stem cell, SSC）をその特性を温存しながら幹細胞特異的マーカー発現を指標に単離・濃縮し、単離株を分子生物学的に解析することにより、HDDPC由来SSCの実体を解明することを目的とする。
まず、HDDPCの不死化を行った。不死化用piggyBac（PB）トランスポゾンベクターpT-hTERT（ヒトTERT cDNAを搭載）を作製し、これと他のマーカー遺伝子を搭載したPBベクター（pT-pac + pT-tdTomato）やtransposase発現ベクターpTransと共に、HDDPCへ遺伝子導入した結果、不死化株を得た。これらは悪性化せず、親株同様、細胞接触阻害や幹細胞特異的マーカーであるアルカリホスファターゼ（ALP）、OCT-3/4、SOX2、NANOG、NESTINを発現。更に、in vitroにおいて神経や骨細胞への分化能を示したことから、「親株の特性を保持したまま細胞の不死化に成功した」と考えられる。
次に、「ALPや OCT-3/4等の幹細胞特異的遺伝子を発現するHDDPCは、iPS細胞化されやすい」という我々の過去の研究結果に基づき、ALP活性検出キットで染色されたHDDPCからALP陽性、陰性細胞を単一細胞として分取。これらを全トランスクリプトーム増幅に付し、得られcDNAを鋳型に各種幹細胞特異的遺伝子の発現をRT-PCR法にて調べた。その結果、ALP陽性細胞はALPとOCT-3/4を発現していた。一方、ALP陰性細胞はALP、OCT-3/4発現はなく、SOX2の発現を認めた。以上から、HDDPCには幾つかの遺伝子発現profileが異なるSSCが存在する」と考えられた。
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