| 研究課題/領域番号 |
18K09867
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| 研究機関 | 東京歯科大学 |
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研究代表者 |
櫻井 敦朗 東京歯科大学, 歯学部, 講師 (90431759)
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| 研究分担者 |
新谷 誠康 東京歯科大学, 歯学部, 教授 (90273698)
本間 宏実 東京歯科大学, 歯学部, 講師 (80637760)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 小児齲蝕 / 食育 / 細菌叢 |
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| 研究実績の概要 |
ヒトの各組織でそれぞれ構成されている細菌叢は健康な状態（ホメオスタシス）の維持と密接に関わっており、こうした細菌叢が撹乱されることは何らかの疾患発生に大きく影響すると考えられている。また、乳幼児期は口腔の細菌叢の形成時期に当たる。生涯にわたって口腔疾患の発生リスクの低い状態を維持するためには、小児期に適切な食習慣や生活習慣を通じ、正しい口腔内細菌叢を構築するための環境作りが、健全な顎口腔機能の育成に重要であると考えられる。これまでに我々のグループでは、口腔内に存在する細菌種数は出生児には少ないが、その後徐々に増加していくこと、属レベルにおいては２歳頃という早期に両親の細菌叢に類似していくことを明らかとしており、この結果も、乳幼児期の正しい口腔内細菌叢つくりが重要であることを示唆している。小児齲蝕の場合、古くからどのような生活習慣が発生リスクを増大させるかという疫学調査が多く行われてきたが、ある食習慣や生活様式がどのようにバイオフィルムの状態、本来あるべき口腔の細菌叢を変化させ、どのように細菌由来の病原因子の発現変化をもたらすかについては、ほとんど明らかでない。
本研究では、口腔内細菌叢の形成過程にある小児（概ね３歳まで）を対象に、口腔内試料を採取して口腔内細菌叢に関するデータを取得し、また、食習慣や生活習慣によってどのように口腔内細菌叢の形成が影響を受けるのかについて、解析を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究では、口腔内細菌叢の形成過程にある０から２歳児を対象に、口腔内試料を継続的に採取して口腔内細菌叢に関するデータを取得している。また、食習慣や生活習慣によってどのように影響を受けるのかを明らかにする予定である。2019年度中に予定していた主な内容は、①2018年度に引き続き試料の採取、②細菌由来ゲノムおよびRNAの抽出、③次世代シーケンサーを用いた口腔内細菌叢解析があげられる。
①については、代表者の所属する小児歯科診療室で、初診時概ね２歳までの15名程度に対して同意を得て試料採取を開始している。新たな被験者の選定は2020年度も行う予定である。被験者の現在歯、口腔内清掃状態や齲蝕・歯肉の状態を記録し、被験者の生活習慣や食習慣についての記述調査を行なっている。のちに、食習慣、生活習慣、齲蝕リスク、性別、年齢などの複数の切り口から２から３群に分類し、のちに群間での比較を行う予定である。また、適切な細菌叢の構築のため、どのようなアプローチが有効かについても検討を開始した。②については、得られた試料から細菌由来のTotal nucleic acidを抽出し、DNase処理およびRNase処理を行ったものを解析に供することにしている。現在行なっているのは主に細菌叢解析のみであるが、今後RNA発現解析も行なっていきたい。③については、前項で得られたゲノムDNAをテンプレートとして、細菌の16S rRNA遺伝子の一部配列の増幅を行い、次世代シークエンサーMiSeqによって遺伝子シークエンスを行っている。得られた配列はウェブ上のデータベースSilva, Human oral microbiome databaseと照合して細菌種を推定している。得られた試料について、順次解析を進めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
2020年度以降も新たな被験者の選定を行い、これまでの被験者と合わせて引き続き試料を採取、total nucleic acidの抽出、口腔内細菌叢解析を行うことを予定している。本研究では、同一小児の口腔内細菌叢の形成過程を観察するため、研究機関の大半を通じて同様の操作が必要である。試料の採取は少なくとも乳歯列の完成する３歳頃までは行う計画である。次に、前項で示したような分類した群間の細菌叢パターンの比較、特異的に存在する菌種のピックアップを行っていく。これについては、細菌叢パターンの比較を、QIIME2を用いて始めている。これは、同一被験者の各試料間、または記述調査の結果で被験者を分類し、その各群間における比較を行い、各群に共通で多く含まれる菌種、一方の群に高頻度に認められる菌種を抽出しようとするものである。またPCoA解析に基づいて細菌叢のパターンを分析し、系統樹の作成、ドットプロット解析を行う。成人との比較、小児齲蝕経験の有無による比較を行い、小児の細菌叢がどのように成人に近づくか、生活習慣や食習慣がどのように影響するかについて検討を加えることとしている。一部の試料については微生物トランスクリプトーム（RNA発現）解析を行いたいと考えている。また、食習慣や生活習慣によってどのように影響を受けるのかを明らかにする。
さらに、齲蝕をはじめとして口腔疾患の発症リスクが高い小児に対してどのようなアプローチを行えば、口腔内細菌叢の健全化が計れるのかについても検討を加える予定である。具体的には、食生活や口腔衛生指導だけでなく、プロバイオティクス効果を有する食品やタブレットの利用や、フッ化物の細菌叢に与える影響を解析したい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本研究において使用予定だった次世代シーケンサーの一時不調もあり、予定より使用回数が少なかったこと。次年度使用額分はシーケンサーにかかる試薬の購入費用として使用する。
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