| 研究課題/領域番号 |
18K09883
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
吉松 昌子 長崎大学, 病院(歯学系), 助教 (20420630)
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| 研究分担者 |
北浦 英樹 東北大学, 歯学研究科, 准教授 (60295087)
藤村 裕治 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 客員研究員 (70448504)
小原 悠 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 客員研究員 (70623825)
森田 幸子 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 助教 (00631574)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 口腔粘膜炎 / Blimp-1 |
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| 研究実績の概要 |
これまでに、がん化学療法誘発口腔粘膜炎におけるBlimp-1の関わりについての報告はない。本研究者が、これまでに骨代謝の分野で研究を進めてきた炎症性サイトカインである TNF-αは、がん化学療法に伴う口腔粘膜炎の発症にも関わっていることが報告されている。 また、Blimp-1は、その作用をブロックするとTNF-αの関わる破骨細胞形成が抑制されるとの報告がある。このことから、Blimp-1がTNF-αと共に口腔粘膜炎の発症・悪化に関わっているのではないかと予想している。これまで、マウス尾部より化学療法剤5-FUを静脈注射して口腔粘膜炎モデルを構築し、Blimp-1発現について研究を進めてきた。中には口腔粘膜炎を発症しないマウスが出現し、その原因の1つとして静脈注射の不成功の可能性が疑われたため、口腔粘膜炎モデルの再考の必要性が生じた。代替として、5-FUを腹腔内投与後、口腔粘膜を酢酸処理して口腔粘膜炎を誘発するモデルにて研究を進めている。口腔粘膜炎部位のBlimp-1の発現や局在を組織学的に確認し、口腔粘膜組織を採取し抽出したmRNAを用いてBlimp-1の発現を定量している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
今年度は口腔粘膜組織におけるBlimp-1の発現について検討を進める予定であったが、口腔粘膜炎モデルの変更が必要となったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
1.口腔粘膜炎を組織学的に解析：野生型マウスに化学療法剤を投与後、経時的に口腔粘膜を採取しパラフィン切片標本を作製する。標本染色によりBlimp-1の発現や局在について評価する。
2.口腔粘膜炎制御因子の解析：野生型マウスに化学療法剤を投与後、経時的に口腔粘膜組織を採取し抽出したmRNAを用いて、Blimp-1の発現を定量し、化学療法剤を投与しないコントロールと比較する。また、野生型とBlimp-1ノックアウトマウスに化学療法剤を投与後、口腔粘膜組織を採取し抽出したmRNAを用いて、炎症性サイトカインTNF-α、IL-1、IL-10、IFN-γ、G-CSFの発現量の経時的変化をreal time RT-PCRにより定量的に評価し、Blimp-1の関わる口腔粘膜炎関連因子を探索する。
3. Blimp-1の口腔粘膜炎制御におけるシグナル伝達の解析：野生型とBlimp-1ノックアウトマウスの口腔粘膜上皮細胞を採取し、化学療法剤を作用させて培養する。培養上清と培養細胞を回収し、in vivoで特定された口腔粘膜炎関連因子についてreal time RT-PCRにて発現量を定量し、Blimp-1の影響を解析する。さらに、野生型マウスより採取した細胞にTNF-αを添加した後化学療法剤を作用させて培養し、Blimp-1の発現量をTNF-αを添加しないコントロールと比較し、TNF-αのBlimp-1への影響を解析する。また、Blimp-1の関わる口腔粘膜炎発現時の標的分子シグナル伝達を解析するために、炎症のシグナル伝達に重要な因子のうちTNF-αの下流にあるTRAF2、NIK、Iκ-B、NF-κBについてWestern blotによりリン酸化を解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
前年度までに組織切片染色やPCRまで一旦研究が進んだが、今年度は再考した口腔粘膜炎モデルにて同様の研究を進めたため、物品購入は少なかった。今後は、新たにシグナル伝達の解析実験に要する物品の購入が必要である。
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