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2021 年度 実施状況報告書

歯周病による動脈硬化発症におけるアディポカインとマクロファージの相互作用解析

研究課題

研究課題/領域番号 18K09914
研究機関長崎大学

研究代表者

古堅 麗子  長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 客員研究員 (90253674)

研究分担者 齋藤 俊行  長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 教授 (10170515)
林田 秀明  長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 客員研究員 (20238140)
研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2023-03-31
キーワードアディポカイン / 歯周病 / 動脈硬化
研究実績の概要

単球系細胞であるU937をPMA処理しマクロファージ化した細胞を用いて、大腸菌および歯周病原菌由来LPSを各種濃度添加後の、培養上清中のPTX-3,PAI-1,MCP-1濃度をELISA法にて測定した。さらに、炎症性サイトカインであるTNF-αを各種濃度添加後の培養上清中のPTX-3,PAI-1,MCP-1濃度をELISA法にて測定し、比較した。培養後細胞よりmRNAを抽出し、real time PCR法にてPTのmRNAレベルを比較し、さらにWestern blotting法にてタンパクレベルでの発現を比較した。
次に、血管内皮細胞とマクロファージ細胞の共培養系を用いて、培養前後の付着細胞の数の変化や遊走した細胞の割合の変化を、各種LPS添加とTNF-αとの併用での変化について、解析をおこなった。さらに、シグナル伝達阻害剤であるp38阻害剤(SB203580)、JNK阻害剤(SP600125)、PI3K阻害剤(LY294002)を前処理後の培養上清中のPTX-3,PAI-1,MCP-1濃度をELISA法にて測定し、比較した。培養後のマクロファージ細胞よりmRNAを抽出し、real time PCR法にてPTのmRNAレベルを比較し、さらにWestern blotting法にてタンパクレベルでの発現を比較した。
培養後の血管内皮細胞は、フローサイトメトリーにて接着因子であるICAM-1,VCAM-1,P-selectinの発現の変化を確認した。
U937をIFN-γで処理し、M1マクロファージにした細胞を用いて、同じ実験系にて、培養上清中のPTX-3,PAI-1,MCP-1、細胞のmRNAやタンパクレベルでの違いと検証し、炎症の状況により、局所でのマクロファージの作用について解析を行っている。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

新型コロナ感染症拡大の影響を受け、抗体などの試薬の入荷が遅れたため、細胞染色が困難となり遅れている。

今後の研究の推進方策

各種条件での刺激で培養後の細胞をイメージングフローサイトメーターを用いて、各種サイトカインなどの発現と細胞形態との関連を解析予定である。

次年度使用額が生じた理由

新型コロナウィルス感染拡大の影響のため、使用予定の抗体など試薬類の入荷が遅れ、購入に至らないものがあったため残額が生じた。繰り越し金は、今後試薬の購入に充てる予定である。

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2021

すべて 学会発表 (2件)

  • [学会発表] 地域住民における歯間ブラシの使用状況と歯周疾患との関連:五島研究2021

    • 著者名/発表者名
      福田英輝、北村雅保、川崎浩二、林田秀明、古堅麗子、岩崎理浩、田代謙輔、前田隆浩、五月女さき子、川下由美子、齋藤俊行
    • 学会等名
      第70回日本口腔衛生学会・総会
  • [学会発表] 地域住民を対象とした舌圧と口腔および全身健康状態との関連性:五島研究2021

    • 著者名/発表者名
      田代謙輔、五月女さき子、船原まどか、川下由美子、北村雅保、福田英輝、古堅麗子、岩崎理浩、林田秀明、川崎浩二、東 美穂、前田隆浩、齋藤俊行
    • 学会等名
      第70回日本口腔衛生学会・総会

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公開日: 2022-12-28  

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