| 研究課題/領域番号 |
18K09922
|
|---|
| 研究機関 | 日本大学 |
|---|
研究代表者 |
Bhawal Ujjal 日本大学, 松戸歯学部, 助教 (50433339)
|
|---|
| 研究分担者 |
田中 ゆり子 東邦大学, 医学部, 講師 (40396685)
佐藤 冬樹 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (60400131)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
|
| キーワード | 唾液腺 / 加齢 / DNAマイクロアレイ / microRNAマイクロアレイ |
|---|
| 研究実績の概要 |
唾液腺（顎下腺）の老齢化過程に及ぼす効果 (DNAマイクロアレイおよびmicroRNAマイクロアレイ解析): 3ヶ月齢および加齢モデルの24ヶ月齢のC57BL / 6マウスを使用し、トータルRNAを唾液腺組織から分離した。それらの遺伝子発現およびmiRNA発現所見は、GeneSpringおよびIngenuity Pathways Analysisと組み合わせ、DNAマイクロアレイおよびmiRNAアレイを用いて解析した。遺伝子オントロジー（GO）分析は、miRNAを標的とした遺伝子の極めて重要な転写関連プロセスと細胞内シグナル伝達を組み込んでいることを明らかにした。シグナル経路で、cAMP媒介シグナル、上皮接着結合シグナル、タイトジャンクションシグナル、ギャップジャンクションシグナル、カルシウムシグナル、およびサーチュインシグナルが唾液腺老化に関与していることも明らかにした。RT-qPCRによりさらに解析したところ、加齢の制御転写因子が、miR-30c-1-3p、miR-34a-5p、miR-92a-3p、miR-181a-5pおよびmiR-550a-3pの制御に関与していることを示した。多数の組み合わせが識別されたmRNAとmiRNAの網羅的解析は、miRNAの異常発現は唾液腺加齢において重要であることを示唆した。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
計画書に沿った進行を行っているが、対象となる生後24ヵ月齢マウスの作成やその系の立ち上げ等に時間を要しているため、計画書以上の進展はない。これら問題点は、これまでの各種検討により徐々に解決されていくと考えられるため、今後は更なる研究の進展が期待される。また、並行して進めているE-cadherinプロモーターレポーター上のE-box mutantを作製においても、系の立ち上げ、検討に大きく時間を要しているが、こちらもこれまで検討を基に、今後研究が進展すると期待されている。
以上のことから、現在までの進捗状況は、計画書を大きく超えて進展するものではないものの、おおむね順調に進展しているものと判断している。
|
| 今後の研究の推進方策 |
DEC1によるE-cadherin制御機構の解明 (ルシフェラーゼアッセイ、クロマチン免疫沈降法): E-cadherinプロモーターレポーター上のE-box mutantを作製し、DEC1発現ベクターとco-transfectionを行い、ルシフェラーゼアッセイによりE-cadherinプロモーターの活性化を比較して、応答配列を同定する。リアルタイムPCR法およびウェスタンブロッティング法により、transfectionの24時間後にDEC1の発現を確認する。クロマチン免疫沈降法 (以下: ChIP) を用いてDEC1のE-cadherinのE-boxに対する直接結合の有無を調べる。
|
