| 研究課題/領域番号 |
18K10034
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| 研究機関 | 近畿大学 |
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研究代表者 |
正木 秀幸 近畿大学, 生物理工学部, 准教授 (90247982)
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| 研究分担者 |
芦田 久 近畿大学, 生物理工学部, 教授 (40379087)
東 慶直 近畿大学, 生物理工学部, 教授 (90333509)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | ジカウイルス / ＧＦＰ / 乳酸菌 / 酵母菌 |
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| 研究実績の概要 |
当初の計画では、乳酸菌発現系に用いるベクターはMoBiTec社NICE Expression System for Lactococcus lactisのpNZ8149を、また酵母菌発現系のそれはInvitrogen社pYD1 Yeast Display Vector KitのpYD1を予定していたが、前者は菌体表面に蛋白質を発現させるモチーフであるLPXTG型細胞壁アンカー遺伝子が含まれないため、それをＣ末端側に含んだ融合蛋白質として発現させるpSGANC332（ヤクルト中央研究所により開発）を、また後者は既に販売終了となっていることが判明したため、酵母菌EBY100株菌体表面にGAL1プロモーター活性化により蛋白質を発現させるpYES3_Aga2P_SacB_AGIA_Aga2m（Invitrogen社pYES3/CTをベースに富山大学大学院医学薬学研究部免疫学部門により作成）を用いるように計画変更した。それぞれのベクターに、ジカウイルス（ZIKV）(strain PRVABC59)の
エンベロープ（E）蛋白質N末端80%部分（E蛋白質アミノ酸残基1-409番目）をコードする遺伝子部分を挿入したpSGANC332_ZIKVE(N80%)及びpYES3_Aga2P_ZIKVE(N80%)_AGIA_Aga2mの構築を計画しているが、ジカウイルスは２種告示において未認定のため、組換え実験には拡散防止措置の大臣確認申請を要し、現在大臣確認申請中で文科省の事前確認による承認段階まで進んだが、未だ認可されていない。よって今年度は、ワクチン抗原のコントロールとして用いる予定のＧＦＰを乳酸菌もしくは酵母菌の菌体表面に発現させる発現ベクターであるpSGANC332_GFP及びpYES3_Aga2P_GFP_AGIA_Aga2mの構築を行ない、両者ともほぼ完成した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
遺伝子組換え実験の大臣確認申請が未認可のため。
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| 今後の研究の推進方策 |
大臣確認申請が認可され次第、研究分担者の協力を基に、pSGANC332_ZIKVE(N80%)及びpYES3_Aga2P_ZIKVE(N80%)_AGIA_Aga2mの構築を鋭意進める。また、研究に十分なエフォートを当てれない点については、研究補助員（アルバイト）の雇用を考慮する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
遺伝子組換え実験の大臣確認申請が未認可のため、ジカウイルスＥ蛋白質を菌体表面に発現させた乳酸菌株及び酵母菌株の作製が出来ず、それらの経口免疫による免疫反応の検討が出来なかったが、現在申請中の大臣申請が認可され次第、乳酸菌や酵母菌及びマウスリンパ球培養用の培地・培養器具、マウス及びその飼料、ELISA用のELISAプレートや標識抗体及び発色基質、エピトープ合成ペプチド、ELISPOTアッセイキット、XTTアッセイキット、マウスIL-2等のサイトカイン、ジカウイルス中和抗体価測定のための安全キャビネットなどを購入する予定である。
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