| 研究課題/領域番号 |
18K10121
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| 研究機関 | 杏林大学 |
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研究代表者 |
武市 敏明 杏林大学, 医学部, 助教 (90460360)
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| 研究分担者 |
塚 正彦 金沢大学, 医学系, 教授 (00272956)
北村 修 杏林大学, 医学部, 教授 (70266609)
桐生 京佳 杏林大学, 医学部, 准教授 (60555051)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 覚せい剤 / ヒト / 脳 / 免疫組織化学 |
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| 研究実績の概要 |
薬物乱用において、覚せい剤中毒による死亡事例については多数報告されている。しかし、死因への関与程度が低いと思慮される事例についての報告は少ない。一方、危険ドラッグの乱用が近年注目されている。しかしながら、その神経毒性についての研究は多くない。さらに、危険ドラッグの種類は年々増加しており、各々の分子種の神経毒性についての基礎研究を経て法医解剖例へ応用するまでには、膨大な時間やコストが必要となる。その為、分子種を限定せずに同様な薬理作用を持つ薬物の使用を明らかに出来る検査の開発は急務であると考える。
そこで本研究は、刺激性乱用薬物の1つである覚せい剤を用いた動物実験の成果を基に、ヒトへの応用及び、基本的な薬理作用が同様と考えられる一群の薬物使用のスクリーニング検査を実際の法医解剖例で行える方法の開発を目指す。
法医解剖例より採取するサンプルは、刺激性薬物により放出されるドーパミン(DA)の神経終末の豊富な線条体、DA作動性神経の神経細胞体の位置する黒質、DA神経終末からのDA放出を制御するグルタミン酸(Glu)作動性神経の細胞体が位置し、そのGlu作動性神経を制御する中脳のGABA作動性神経の投影先である視床とした。こららのサンプルに対して、神経細胞やグリア細胞のマーカー蛋白の発現状態を免疫組織化学的手法により解析する。
本年度は、覚せい剤事例１事例について免疫組織化学的手法による解析を行った。その結果、視床においては、薬物の関与の無い急死事例を対照として、グルタミン酸作動性神経のマーカー蛋白質の増加傾向を認めた。しかしながら、線条体ではバックグラウンドが高く、変化の有無が不明であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
乱用薬物の事例との遭遇が予想よりも少なく、免疫組織化学的手法による解析に適した組織試料の採取が困難であった。さらに線条体では、我々の採用した実験条件においてバックグラウンドが高く、データの解析が困難であることが明らかとなり、解析方法の再検討が必要となった。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続き、該当事例の収集に努める。さらにバックグラウンドが高く、データ解析が困難であったサンプルにおいて、解析が可能となるようなバックグラウンドの低減方法を検討する。
具体的には、自家蛍光を抑制する試薬(Glycine BufferまたはTrueVIEW Autofluorescence Quenching Kit)を用いて、シグナル/バックグラウンド比が改善するか検討する。さらに、蛍光強度のより高い蛍光２次抗体への変更を検討する。
前述のバックグラウンド低減の方法が上手くいかない場合、パラフィン包埋ブロックから蛋白質を抽出し、これを試料としたWestern blotting法によるターゲットとなるマーカー蛋白質の半定量的解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
１）平成30年度の法医実務上、覚醒剤をはじめとした刺激性薬物の使用歴を有する事例や、乱用薬物による中毒死の事例との遭遇が予想したよりも少なく、関連するヒト組織試料の採取も困難であった事が第一の理由である。支出に予定された消耗品等は、下記の病理組織学的検討のプロセスと連動しているため、上記の理由のため支出額が抑えられて残金（142,900円）が発生した。
２）学会参加等の出張旅費についても、該当する学会発表に要する費用が、偶然に別の予算から捻出可能であったため、当該年度から支出していない。
分担された当初の次年度平成31年度使用予定額（200,000円）と平成30年度助成金残金（142,900円）と合わせた額は、引き続き予定している病理組織学的検索に必要な消耗品、病理組織標本作製、必要に応じた免疫組織化学的検討と、これら標本の保管に要する標本箱の購入等に充てて使用することを計画している。
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