| 研究課題/領域番号 |
18K10996
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| 研究機関 | 青森県立保健大学 |
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研究代表者 |
今 淳 青森県立保健大学, 健康科学部, 教授 (60271798)
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| 研究分担者 |
井澤 弘美 青森県立保健大学, 健康科学部, 准教授 (20315534)
乗鞍 敏夫 青森県立保健大学, 健康科学部, 准教授 (40468111)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 蒲黄 / 創傷治癒 / 古事記 / 花粉 / 皮膚 / 蒲 |
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| 研究実績の概要 |
令和2年度は，これまでの結果を踏まえ，蒲黄により発現が著明に変動する遺伝子及びタンパク質を更に詳細に解析した。既に我々は，蒲黄は創傷治癒機構を促進し，その際には，炎症期，増殖期など創傷治癒機構の初期から中期にかけては強く作用し，後半の組織再構築期には抑制的に作用している可能性を見出している。そこで，今年度は，第一に，創傷治癒機構後期に重要であるが，過剰発現が線維化（傷跡）の原因となる真皮の各種コラーゲン遺伝子の発現変動について更に解析を行った。その結果，いずれのコラーゲン遺伝子は発現が抑制し，この機構は，転写阻害剤による阻害実験の結果から，転写レベルで抑制していることを見出した。その一方，真皮コラーゲンの機能に抑制的に作用し，抗線維化能を有するデコリン遺伝子は，蒲黄により発現が促進し，この機構も，阻害実験の結果から，転写レベルで促進することを見出した。そこで次に，各種コラーゲン，デコリン遺伝子の転写調節領域（プロモーター領域）をルシフェラーゼアッセイで解析し，蒲黄による転写の変動に重要な領域（応答配列）をかなり絞り込んだ。第二に，既に我々は，蒲黄によって新たに誘導されて発現するようになった2種類の遺伝子を見出している。そこで今年度は，この遺伝子の発現変動に関しても詳細に解析した。その結果，各遺伝子の発現は，蒲黄によって遺伝子レベル及びタンパク質レベルで誘導され，強力な促進作用を受けていた。しかも蒲黄の濃度及び反応時間依存性に促進しており，更に阻害実験の結果から，これらの遺伝子も全て転写レベルでの発現促進を受けていることを明らかにした。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
今年度も蒲黄により発現が著明に促進及び抑制する遺伝子を同定し，その制御機構の詳細を解析した。現在はその転写調節機構の解析をルシフェラーゼアッセイ，ゲルシフトアッセイ等で行っており，蒲黄による応答配列の完全同定に迫っている。 しかしながら，転写調節領域のゲルシフトアッセイによる解析のための抗体を始め，各種試薬がCOVID-19の影響で入手遅延や困難が関与し，今年度の研究はやや遅れを生じた。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は，現在進行中の各遺伝子の各種阻害実験やプロモーター領域の解析により，蒲黄の応答配列と転写因子を完全に同定する。特に新たに発現が出現した2種類の遺伝子の何れかはマスター遺伝子である可能性が高いため，この発現制御機構の解析も更に行い，この遺伝子の阻害によって創傷治癒機構が阻害されるかに迫る予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
令和2年度には，蒲黄による創傷治癒関連遺伝子及びタンパク質の発現変動，遺伝子導入実験，転写機構の解析を行った。そのため，解析用の試薬の多数購入を計画したが，COVID-19の影響があり，納品の遅れによる多少の研究の遅れ，試薬の入手困難も生じ，そのために未使用額（27641円）を生じた。データを確実なものにするために，今後も同じ解析を繰り返し行う必要があるために，未使用額は次年度以降の経費に充てることにしたい。
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