研究課題/領域番号 |
18K11041
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研究機関 | 北海道大学 |
研究代表者 |
武田 晴治 北海道大学, 保健科学研究院, 准教授 (80374726)
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研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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キーワード | 低比重リポタンパク質 / 硬さ / 抗酸化物質 / 糖 |
研究実績の概要 |
低比重リポタンパク質(LDL)を酸化すると柔らかくなることを報告している。本研究では、柔らかいLDLが酸化しているのか、マクロファージ泡沫化を惹起するのか?柔らかいLDLが真の悪玉LDLなのかという点を明らかにする研究である。本年度はLDLの硬さに及ぼす因子があるかどうかについて調べた。フラボンを中心にクロロゲン酸、クルクミン、ルテオリン、ケンフェロールなど8種類の抗酸化剤をLDLに添加したときの影響を検討した。LDLの硬さを大きく変動させた抗酸化剤はなかったが、ケンフェロールについては有意差を持って柔らかくなる結果が得られた。このことよりLDLの硬さは酸化だけではなく、他要素の影響を受ける可能性があることが判明した。 また、グルコースで糖化をしたLDLも有意差を持ってLDLの硬さが柔らかくなることが判明した。糖化の反応中にLDLが酸化されている可能性を考え、過酸化脂質量をDPPPによる蛍光で、脂質過酸化により生成するアルデヒド類のうちのマロンジアルデヒドをTBARSとして測定した。過酸化脂質量について有意差は観察されないが、わずかに増加する傾向が観察された。TBARSの増加は観察されなかった。このことより糖化中の酸化が柔らかくしたのではなく、糖化によるLDL表面の修飾でLDLの硬さが柔らかくなること可能性があることが示唆された。 抗体を利用して酸化LDLと未酸化LDLを基板に選択的に固定化する方法についても実施をした。しかし、抗体を固定化した基板にLDLまたは酸化LDLを添加しても吸着量が非常に少ないことが判明した。抗体の活性はELISAで確認しており、抗体の活性はあると考えられる。今回、抗体を金基板上に物理的に吸着させる方法を用いたが、他の方法でプロテインGを用いるなど検討する必要があると考えられる。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度予定していた、抗体を用いて選択的に未酸化LDLと酸化LDLを基板に固定化して、その硬さの分布を調べる研究は遅れている。一方で、柔らかいLDLがマクロファージを泡沫化させるのかについての検討に時間が必要であることから、LDLの硬さを変化させる要素の研究を前倒しして研究を実施した。全体としては、やや遅れている状況である。 研究が全体的にやや遅れている要因として、AFM装置の故障があげられる。故障を想定して二台の装置を並行して利用できる体制としていたが、9月から12月にかけて二台がほぼ同時に故障してしまった。 一台の装置は経時的な要素が原因と考えられ複数箇所が故障していて時間がかかったということと、もう一台は比較的に新しい装置であるが修理部品の到着が大幅に遅れたためである
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今後の研究の推進方策 |
プロテインAまたはGを用いて抗体を固定化する方法を試みる。抗体を用いて酸化LDLと未酸化LDLを選択的に固定化して硬さの分布を解析する予定である。また、別の抗体も検討する。 抗酸化剤がLDLの硬さに及ぼす影響について再現性を確認する。また、抗酸化剤、食品を中心に更に7サンプルほど追加して、硬さに及ぼす影響を調べる予定である。 糖化したLDL(柔らかくなったLDL)、リパーゼで処理したLDL(柔らかくなったLDL)、抗酸化剤の共存下で加温したLDL(抗酸化剤により硬さが柔らかくなったLDLと硬さが変化しなかったLDL)に対してマクロファージの泡沫化が起こるかどうかについて検討する予定である。これにより、硬さの変化とマクロファージの泡沫化の関係を検討する予定である。
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次年度使用額が生じた理由 |
AFM装置の故障により予定していた測定ができなかった。その結果、測定で使用予定であったAFMの探針、装置利用代金、および測定の補助をする技術補助員の雇用費が次年度使用額として残った。30年度に予定していた測定を実施する予定で、その費用として利用する予定である。
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