| 研究課題/領域番号 |
18K11639
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
黒谷 賢一 名古屋大学, 生物機能開発利用研究センター, 特任講師 (10402778)
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| 研究分担者 |
岡 泰由 名古屋大学, 環境医学研究所, 講師 (60762383)
荻 朋男 名古屋大学, 環境医学研究所, 教授 (80508317)
嶋田 繭子 名古屋大学, 環境医学研究所, 技術補佐員 (80623834)
唐田 清伸 名古屋大学, 環境医学研究所, 客員研究者 (90345017) [辞退]
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | DNA損傷応答 / インタラクトーム解析 |
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| 研究実績の概要 |
DNA損傷応答 (DNA damage response, DDR)はゲノムの安定化に極めて重要な反応である。DDR蛋白質の細胞内での機能を理解するためには、蛋白質-蛋白質間の相互作用 (Protein-protein interaction, PPI)ネットワークを詳細に知る必要がある。本研究では、精密質量分析装置を利用した、ヒト細胞におけるDDR蛋白質のインタラクトーム解析を実施する。新規のDDR蛋白質の同定ならびにその機能解析を実施することで、DDRの理解を深めることを目的とする。
2020年度は、DNA損傷後のRNAポリメラーゼII (RNAPII)の最大サブユニットであるPOLR2A/RPB1のインタラクトーム解析を実施した。RPB1はC末端領域にYSPTSPS の7アミノ酸からなる繰り返し配列 (CTDリピート)を持っているが、このCTDリピートは、転写反応中に可逆的なリン酸化を受けることが知られている。その中で、転写伸張中のRPB1はCTDの2番目のSer残基がリン酸化される。そこで、転写伸張中のRPB1のインタラクトーム解析を実施するため、CTDの2番目のSer残基のリン酸化型RPB1 (RPB1-Ser2)を特異的に認識する抗体を用いて免疫沈降を行い、プロテオーム解析サンプルを作製した。また、ERCC6/CSBは、コケイン症候群の疾患関連遺伝子であり、転写共役型ヌクレオチド除去修復に関与することが知られている。そこで、CRISPR-Cas9ゲノム編集技術により作製したCSB欠損細胞を用いて、RPB1のインタラクトーム解析を実施した。その結果、DNA損傷特異的に、RPB1-Ser2がPAF1複合体 (PAF1C)と相互作用すること、その相互作用がCSB依存的であることが明らかになった。
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