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2018 年度 実施状況報告書

立体流路における神経幹細胞

研究課題

研究課題/領域番号 18K13515
研究機関国立研究開発法人理化学研究所

研究代表者

川口 喬吾  国立研究開発法人理化学研究所, 生命機能科学研究センター, 理研白眉研究チームリーダー (00787319)

研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2022-03-31
キーワード細胞集団運動
研究実績の概要

自発的な要素がより集まって織りなすマクロな現象を理解する枠組みとして、アクティブマターと呼ばれる領域が近年注目を集めている。これまでのアクティブマター研究では、生体分子や鳥の群れなどが主に対象とされてきたが、発生初期のダイナミクスや恒常的な組織における細胞集団移動のようなメゾスケールの現象にこそ、こうした物理的なアプローチが力を発揮することが期待される。本研究では、マウス由来の神経幹細胞を用いて、細胞が多数集まってできる配列パターン・構造と、その中で細胞が激しく運動し続けていること(=アクティブ性)がカップルして生じる現象の普遍的な理解を目指す。特に、3次元系における細胞流の実験系を構築し、その解析を行うことを目標としている。

2018年度は、神経幹細胞の細胞核(H2B)、F-アクチン(Lifeact)といった細胞運動や形状変化を観察するための因子や、細胞間接着において重要な役割を果たすと考えられるN-cadherin、alpha-E cateninを蛍光タンパクで標識するため、遺伝子導入法を条件検討した。具体的には、エレクトロポレーションとレンチウィルスを用いた遺伝子導入法試し、神経幹細胞への導入効率はエレクトロポレーション法が最も良いことを確認した。遺伝子導入後、ソーティングした細胞を増殖させ、さらに限界希釈法を用いて1細胞由来のクローンを作成した。こうして得られた細胞を、新規に導入した蛍光顕微鏡と共焦点顕微鏡を用いて2日以上にわたり細胞集団運動を観察することに成功した。

3次元の培養方法について、神経幹細胞をマイクロパターンの中に封入する方法、透明なチューブの形状の中に培養する方法など、さまざまな条件を検討した。その結果、ラミニンを主成分とする細胞外基質であるマトリゲルに神経幹細胞を高濃度で混ぜ、任意の形状にプレートする方法が最も有力であると発見した。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

2018年9月より研究室を立ち上げ、細胞培養・レンチウィルスによる遺伝子導入・マイクロパターン作成の実験をスタートさせた。遺伝子導入法の確立に数か月を要した他は、進捗は順調である。3次元培養方法については多数の条件を試し、良い結果が得られている。

今後の研究の推進方策

遺伝子導入・顕微鏡観察・サンプル調整の技術がそろったため、データを取りためるとともに、3次元画像の解析を進める。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2019 2018

すべて 雑誌論文 (2件) (うち国際共著 1件、 査読あり 2件) 学会発表 (4件) (うち招待講演 4件)

  • [雑誌論文] Homeostatic epidermal stem cell self-renewal is driven by local differentiation2018

    • 著者名/発表者名
      Kailin R. Mesa, Kyogo Kawaguchi, Katie Cockburn, David Gonzalez, Jonathan Boucher, Tianchi Xin, Allon M. Klein, and Valentina Greco
    • 雑誌名

      Cell Stem Cell

      巻: 23 ページ: 677--686

    • DOI

      10.1016/j.stem.2018.09.005

    • 査読あり / 国際共著
  • [雑誌論文] Unattainability of Carnot efficiency in thermal motors: Coarse graining and entropy production of Feynman-Smoluchowski ratchets2018

    • 著者名/発表者名
      Yohei Nakayama, Kyogo Kawaguchi, and Naoko Nakagawa
    • 雑誌名

      Physical Review E

      巻: 98 ページ: 022102

    • DOI

      10.1103/PhysRevE.98.022102

    • 査読あり
  • [学会発表] Nonequilibrium physics of multicellular dynamics2019

    • 著者名/発表者名
      川口喬吾
    • 学会等名
      定量生物学の会・年会
    • 招待講演
  • [学会発表] 成体組織恒常性の普遍モデルとその性質2019

    • 著者名/発表者名
      川口喬吾
    • 学会等名
      日本細胞生物学会
    • 招待講演
  • [学会発表] Multicellular systems and nonequilibrium physics2018

    • 著者名/発表者名
      川口喬吾
    • 学会等名
      Yukawa Institute & RIKEN iTHEMS joint meeting
    • 招待講演
  • [学会発表] Spatio-temporal fate coordination in skin homeostasis2018

    • 著者名/発表者名
      川口喬吾
    • 学会等名
      日本分子生物学会
    • 招待講演

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公開日: 2019-12-27  

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