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2018 年度 実施状況報告書

2型TNF受容体の選択的クラスタリング作用に基づく制御性T細胞の新規増幅法

研究課題

研究課題/領域番号 18K14877
研究機関神戸学院大学

研究代表者

井上 雅己  神戸学院大学, 薬学部, 助手 (80757097)

研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2020-03-31
キーワード制御性T細胞 / イムノサイトカイン / TNFR2
研究実績の概要

本研究は、2型TNF受容体(TNFR2)シグナルを選択的かつ強力に活性化するため、独自に開発した「TNFR2アゴニストタンパク質」と「TNFR2に対する一本鎖抗体(scFv)」を融合した機能性イムノサイトカイン(Immuno-Cytokine, ICK)を創製し、TNFR2のシグナリング/クラスタリング作用に基づく制御性T細胞(Treg)選択的な新規増幅法の開発を目指すものである。Tregは免疫抑制機能に特化したリンパ球であり、自己免疫疾患や臓器移植の拒絶反応、移植片対宿主病(GvHD)において、末梢性Tregの量的増加による免疫寛容の強化を狙った治療法が期待されている。
本年度は、イムノサイトカインの創製を行った。はじめに、リガンドであるTNFと非競合的にTNFR2に結合する抗ヒトTNFR2-IgG抗体遺伝子を取得し、重鎖及び軽鎖の可変領域配列を用いて、抗TNFR2-scFv抗体遺伝子配列を作製した。続いて、申請者らが開発してきたヒトTNFR2アゴニストであるR2-7アゴニストタンパク質を一本鎖化構造修飾し、イムノサイトカイン用に構造を最適化したscR2-7アゴニストの遺伝子配列を作製した。これらの抗体とアゴニストがペプチドリンカーで直鎖状に融合するようにイムノサイトカイン(TNFR2-ICK)遺伝子を設計・合成し、発現ベクターに組み換えた。HEK293F細胞に遺伝子導入し、TNFR2-ICKタンパク質を発現させた後、アフィニティクロマトグラフィーとゲルろ過クロマトグラフィーで精製した。電気泳動等での等からTNFR2-ICKが問題なく創製されたことが確認できた。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

TNFR2-scFv抗体配列の取得、およびTNFR2アゴニストタンパク質の構造最適化を行い、当初の計画通り、両者を結合したイムノサイトカインを創製できた。

今後の研究の推進方策

TNFR2-ICKタンパク質の詳細なin vitro機能解析とin vivo薬理実験を行う。TNFR2結合性やシグナル伝達機構などのTNFR2-ICKの分子特性解析、Treg増幅活性の効率や選択性などの機能解析を行う。また、マウスでの体内動態を解析した後、リンパ球移入マウスを用いて、TNFR2-ICKの生体内でのTreg増幅活性を調べる。以上の解析から、Treg選択的な新規増幅法としてのTNFR2-ICKの有用性を検証していく。

次年度使用額が生じた理由

2018年度に参加した国際学会の旅費が当初の予定よりも低く抑えられたため、次年度使用額が生じた。繰り越し分は2019年度の研究計画を推進するための物品費として使用する。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2018

すべて 学会発表 (6件) (うち国際学会 1件)

  • [学会発表] Trimeric structural fusion of an antagonistic tumor necrosis factor-α mutant enhances molecular stability and enables facile modification.2018

    • 著者名/発表者名
      Inoue M, Kamada H, Tsutsumi Y, Tsunoda S.
    • 学会等名
      The 45th Controlled Release Society Annual Meeting & Exposition
    • 国際学会
  • [学会発表] 免疫制御薬としてのTNFR1選択的アンタゴニストTNF変異体の構造最適化 - 一本鎖化及びFc融合の有効性の検討 -2018

    • 著者名/発表者名
      井上雅己、大崎奈都喜、國重将大、三木望稔里、小野寺章、河合裕一、鎌田春彦、堤 康央、角田慎一
    • 学会等名
      第91回日本生化学会大会
  • [学会発表] TNFR1選択的アンタゴニストFc融合タンパク質の創製と新規関節リウマチ治療薬としての有効性評価2018

    • 著者名/発表者名
      吉峯千夏、井上雅己、鎌田春彦、小野寺 章、河合裕一、角田慎一
    • 学会等名
      日本薬学会第139年会
  • [学会発表] 2型TNF受容体シグナルの欠損による制御性T細胞を介した抗腫瘍免疫への影響2018

    • 著者名/発表者名
      森田有貴、井上雅己、小野寺 章、河合裕一、角田慎一
    • 学会等名
      日本薬学会第139年会
  • [学会発表] Tregを標的とした免疫制御薬としてのTNFR2アゴニストの有用性評価2018

    • 著者名/発表者名
      辻 優太、井上雅己、安藤大介、鎌田春彦、小野寺 章、河合裕一、角田慎一
    • 学会等名
      日本薬学会第139年会
  • [学会発表] ファージ表面提示法を活用したTNFαの構造改変によるTNFR2アゴニストタンパク質の創製と特性評価2018

    • 著者名/発表者名
      29.榎本章太、井上雅己、安藤大介、鎌田春彦、小野寺 章、河合裕一、角田慎一
    • 学会等名
      日本薬学会第139年会

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公開日: 2019-12-27  

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