研究課題
poly(I:C)投与マウスにおける行動異常に関連するLINE-1サブファミリーを同定するため、成体poly(I:C)投与マウスについて行動解析を行い、その後前頭葉組織を採取した。行動解析では、poly(I:C)投与群における行動異常を特定できた。現在、同一検体脳を用いたLINE-1コピー数を測定し行動スコアと相関するLINE-1サブファミリーを抽出するため、DNAサンプルの準備を進めている。LINE-1コピー数アッセイについては、公開データベースよりマウスLINE-1のコンセンサス配列を入手し、転移活性を保持しているサブファミリー特異的なPCRプライマーを設計することに成功した。作製できたプライマーを用いてPCRを行った産物について、電気泳動およびサンガーシーケンス法によって非特異的な増幅の有無を確認し、作製した複数のプライマーセットから本研究に用いる候補を選出した。胎生期に転移活性の増大を示すLINE-1の分子メカニズムを同定するため、胎仔poly(I:C)投与マウス脳組織からDNA・RNA精製を行った。時期依存的なLINE-1のエピゲノム動態についてより広範囲に調べるため、当初予定していた解析法を発展させ、次世代シーケンサーを用いたDNAメチル化解析法を樹立中である。樹立でき次第、胎仔poly(I:C)投与マウス脳組織を供し、解析を進める。また、LINE-1関連遺伝子群・分子経路を同定するために用いるRNA sequencing解析においても、ライブラリー作製・解析方法の樹立を確認しており、順次poly(I:C)投与マウスサンプルを用いた解析を進めていく。
1: 当初の計画以上に進展している
LINE-1サブファミリー特異的な測定アッセイの樹立に成功した上、エピゲノム解析については当初の計画をさらに発展させる実験系の確立を進めている。行動解析が完了し、解析サンプルの準備も整いつつあり、順調に計画が進捗していると考えられる。
成体期の行動異常と関連するLINE-1動態を同定していくとともに、現在樹立中のエピゲノム解析、そして発現量解析を通し、胎生期LINE-1活性異常の分子基盤についての解析を推し進める。
予測よりも少ないボリュームで実験が実施できたため。
すべて 2019 2018
すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (9件) (うち国際学会 3件、 招待講演 1件)
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