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本研究では重粒子線照射に対する細胞応答反応における二次的バイスタンダー効果の解析を行うため、①バイスタンダー細胞の非照射細胞に対する影響についての研究、②バイスタンダー細胞の照射細胞に対する影響についての研究、③バイスタンダー細胞の、別に照射された細胞に対する影響についての研究、の3研究を予定していた。
令和2年度は前年度からの続きとして、まず②バイスタンダー細胞の照射細胞に対する影響についての研究を行った。この研究ではバイスタンダー細胞が、照射細胞に対してどのような影響を与えるかを検討した。プレート2枚とインサート1枚に細胞を培養し、プレート1枚に対してX線を照射した。その後照射細胞とインサートに培養した非照射細胞を共培養した。一定時間共培養した後、バイスタンダー細胞は破棄し、もう1枚のプレートに培養した細胞にX線を照射し、これを対照として、照射細胞Aがバイスタンダー細胞Bから受けた影響について、53BP1の免疫蛍光染色やMicronuclei法を用いて定量的に評価した。
続いて、③バイスタンダー細胞の、別に照射された細胞に対する影響についての研究を検討した。この研究ではバイスタンダー細胞が、別に照射された細胞に対してどのような影響を与えるかを検討した。プレート3枚とインサート1枚に細胞を培養し、プレート1枚に対してX線を照射した。その後照射細胞とインサートに培養した非照射細胞を共培養し、バイスタンダー細胞を作製した。一定時間共培養した後、別のプレートに培養した細胞にX線を照射し、バイスタンダー細胞Bを、照射細胞Cと共培養した。残りの1枚のプレートに培養した細胞にX線を照射し、これを対照として、照射細胞Cがバイスタンダー細胞Bから受けた影響について、53BP1の免疫蛍光染色やMicronuclei法を用いて定量的に評価した。
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