| 研究課題/領域番号 |
18K15664
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| 研究機関 | 山梨大学 |
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研究代表者 |
篠原 珠緒 山梨大学, 大学院総合研究部, 医学研究員 (80747452)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 小児急性リンパ性白血病 / 微小残存病変 / 遺伝子メチル化 |
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| 研究実績の概要 |
・公的データベースに登録されたB前駆細胞型ALL663例、T細胞型ALL101例と、寛解期骨髄86例におけるメチロームデータを対象に約48.5万カ所のCpG配列を分析した。その結果、B前駆細胞型ALL症例とT細胞型ALL症例のそれぞれに、白血病細胞で高いメチル化状態を呈し、かつ、寛解期骨髄で非メチル化状態を呈する領域を複数ヶ所同定した。これらのCpGサイトは部位的な集積があった。
・そこで、特に弁別能の高い領域に存在するCpGサイト群の平均メチル化率を、細胞株(n＝37)ならびに凍結保存初発時臨床検体(n＝49)を用いて次世代シークエ ンサーで解析した。その結果、北欧の臨床検体におけるメチロームと同様に、同領域は白血病細胞株でも高いメチル化状態を呈した。さらに正常コントロールとして用いた正常リンパ球では非メチルを呈した。
・候補解析領域の中で最も弁別能が高い部位について、各CpGサイトに分けてより詳細に解析したところ、全ての細胞株でほぼ100％に近いメチル化状態を呈するCpGサイトの一群がまとまって存在していた。このCpGサイト群のみを抽出して平均メチル化率を再解析すると、中間のメチル化ピークが消え、細胞株のみならず臨床検体においても明瞭な二峰性のピークがみられた。なお、正常リンパ球では変わらず0％であった。
・ここまでの解析によって、正常細胞と白血病細胞をより効率よく弁別する部位を同定することに成功しているため、最適なプライマー設計を組み臨床検体での実験に応用予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
公的データベースから抽出した白血病に特異的なメチル化部位が、細胞株および凍結臨床検体でも高メチル化を示し正常リンパ球で低メチル化を示すことを、 次世代シーケンサーを用いたメチローム解析でも証明できており、また、次世代シーケンサーで各CpGサイトのメチル化率を個別に解析することで、特に白血病と寛解期骨髄とを効率よく弁別しうる部位が存在することが明らかになっているため、今後は当科で保存してある白血病細胞の臨床検体を用いて、白血病発症時・治療終了後・再発時のサンプルでメチル化率の解析を行うため倫理委員会への申請準備をしているところである。そのためおおむね順調に進展していると判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
倫理委員会の許可が得られ次第、臨床検体での実験を開始する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
人事異動があり、実験者が臨床業務を主に行うようになり予定通りの実験が進まなかったため次年度使用額が生じた。また、産休に入るため令和3年度7月16日から実験を再開予定である。実験再開時には当科で保存してある白血病細胞の臨床検体を用いて、白血病発症時・治療終了後・再発時のサンプルでメチル化率の解析を行う予定であり、費用をあてる。
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