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2019 年度 実施状況報告書

サイトメガロウイルス感染合併炎症性腸疾患における重症化、難治化機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 18K15747
研究機関京都大学

研究代表者

山本 修司  京都大学, 医学研究科, 特定病院助教 (00789638)

研究期間 (年度) 2018-04-01 – 2021-03-31
キーワード炎症性腸疾患 / サイトメガロウイルス
研究実績の概要

本研究は、T細胞受容体α鎖欠失 (T cell receptor α knock out, TCRαKO)マウスに1週齢でマウスサイトメガロウイルス (murine cytomegalovirus, MCMV)を感染させた炎症性腸疾患CMV感染マウスモデルを用いて炎症性腸疾患におけるCMV感染による難治化のメカニズムの解明を目指している。これまでの研究成果は以下の通りである。
1.TCRαKOマウスにデキサメタゾン(dexamethasone, Dex)を投与したところ、MCMV感染マウスではDex投与で腸炎の改善を認めず、MCMV非感染マウスと比べて有意に腸炎が悪化していた。MCMV感染マウスの大腸組織の遺伝子発現はTh2からTh1/17優位に変化していた。
2.TCRαKOマウスから作成した骨髄由来マクロファージをex vivoでLPS刺激実験を行ったが、炎症性サイトカイン産生はMCMV感染の有無で差異は認められなかった。
3.TCRαKOマウスから単離した大腸粘膜固有層単核球(lamina propria mononuclear cells, LPMC)を用いてex vivoでCD3/CD28刺激やPMA/Ionomycin刺激を行った。いずれの刺激においてもMCMV感染マウスの方がMCMV非感染マウスと比較してIFNγやIL-17Aの産生が増加していた。Dexによる大腸LPMCのT細胞活性抑制効果をex vivoでCD3/CD28刺激やPMA/Ionomycin刺激で検討したが、MCMV感染マウスとMCMV非感染マウスで差を認めなかった。Dex投与後のT細胞でのグルココルチコイド誘導遺伝子の発現なども検討したが、MCMV感染の有無で差異を認めなかった。
5.TCRαKOマウスの大腸組織でのIL7やケモカイン産生を評価したが、MCMV感染の有無で差異を認めなかった。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

当初MCMV感染でステロイド治療抵抗性の原因と考えていた単球・マクロファージの機能にMCMV感染の有無で変化が認められなかった。このため他の細胞成分に検討の対象を広げて検討したところ、MCMV感染によるT細胞機能の変化を示唆する実験結果が得られた。このためTCRαKOマウスの大腸LPMCを用いてex vivoでT細胞のステロイド抵抗性を検討したが、予想に反してMCMV感染の有無に関係なくDexによりT細胞活性化が抑制された。
当初はCMV難治化機序のメカニズム解析が終了し、抗ウイルス剤投与などを行う予定であったがそこまで到達していない。

今後の研究の推進方策

MCMV感染によるT細胞機能の変化を示唆する実験結果が得られているが、Dex投投与下でのex vivo刺激ではCMV感染の有無でT細胞活性化に差がみられなかった。
このため、MCMV感染・非感染のTCRαKOマウスにそれぞれDex治療を行った後の大腸LPMCを用いてT細胞の機能解析を行う予定である。
さらに血球細胞以外の腸管上皮や線維芽細胞などの機能解析を行う予定としている。

次年度使用額が生じた理由

当初MCMV感染でステロイド治療抵抗性の原因と考えていた単球・マクロファージの機能にMCMV感染の有無で変化が認められなかった。このため他の細胞成分に検討の対象を広げて検討したところ、MCMV感染によるT細胞機能の変化を示唆する実験結果が得られた。このためTCRαKOマウスの大腸LPMCを用いてex vivoでT細胞のステロイド抵抗性を検討したが、予想に反してMCMV感染の有無に関係なくDexによりT細胞活性化が抑制された。
当初はCMV難治化機序のメカニズム解析が終了し、抗ウイルス剤投与などを行う予定であったがそこまで到達していない。
このため、MCMV感染・非感染のTCRαKOマウスにそれぞれDex治療を行った後の大腸LPMCを用いてT細胞の機能解析を行う予定である。さらに血球細胞以外の腸管上皮や線維芽細胞などの機能解析を行う予定としている。

  • 研究成果

    (13件)

すべて 2020 2019 その他

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (9件) (うち国際学会 4件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Frequent mutations that converge on the NFKBIZ pathway in ulcerative colitis2019

    • 著者名/発表者名
      Kakiuchi Nobuyuki,Yoshida Kenichi,Uchino Motoi,Kihara Takako,Akaki Kotaro,Inoue Yoshikage,Kawada Kenji,Nagayama Satoshi,Yokoyama Akira,Yamamoto Shuji, et al
    • 雑誌名

      Nature

      巻: 577 ページ: 260~265

    • DOI

      10.1038/s41586-019-1856-1

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Multiplexed monitoring of therapeutic antibodies for inflammatory diseases using Fab-selective proteolysis nSMOL coupled with LC-MS2019

    • 著者名/発表者名
      Iwamoto Noriko、Takanashi Megumi、Yokoyama Kotoko、Yonezawa Atsushi、Denda Masaya、Hashimoto Motomu、Tanaka Masao、Ito Hiromu、Matsuura Minoru、Yamamoto Shuji、Honzawa Yusuke、Matsubara Kazuo、Shimada Takashi
    • 雑誌名

      Journal of Immunological Methods

      巻: 472 ページ: 44~54

    • DOI

      10.1016/j.jim.2019.06.014

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Jejunal diaphragm disease associated with cytomegalovirus infection2019

    • 著者名/発表者名
      Kagebayashi Sumika、Yamamoto Shuji、Seno Hiroshi
    • 雑誌名

      Endoscopy International Open

      巻: 07 ページ: E533~E536

    • DOI

      10.1055/a-0848-8172

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] 潰瘍性大腸炎におけるチオプリン製剤最適化の指標に関する検討2020

    • 著者名/発表者名
      北本博規、山本修司、本澤有介、妹尾浩
    • 学会等名
      日本消化器病学会近畿支部 第112回例会
  • [学会発表] Reactivation of Epstein-Barr virus and cytomegalovirus behaves differently in pathophysiology of ulcerative colitis2020

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Yamada, Shuji Yamamoto, Yusuke Honzawa, Yuki Hayashi, Hiroki Kitamoto, Makoto Okabe, Hiroshi Seno
    • 学会等名
      15th congress of ECCO
    • 国際学会
  • [学会発表] 潰瘍性大腸炎治療の変化がCMV感染合併例の臨床転帰に及ぼす影響について2019

    • 著者名/発表者名
      北本博規、山本修司、妹尾浩
    • 学会等名
      JDDW 2019
  • [学会発表] HYA,A Metabolite of Linoleic Acid by the Commensal Bacteria, Ameliorates Colonic Inflammation in IL-10-deficient Mice Through the Alteration of Macrophage Function2019

    • 著者名/発表者名
      Makoto Okabe, Minoru Matsuura, Hiroki Kitamoto,Satoshi Yamada,Yusuke Honzawa, Shuji Yamamoto, Hiroshi Seno, Shigenobu Kishino,Jun Ogawa
    • 学会等名
      Digestive disease week 2019
    • 国際学会
  • [学会発表] Risk factors of Epstein-Barr virus and cytomegalovirus reactivation in colonic mucosa of patients with artive ulcerative colitis2019

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Yamada, Shuji Yamamoto, Yusuke Honzaawa, Hiroki Kitamoto, Makoto Okabe, Minoru Matsuura, Hiroshi Seno
    • 学会等名
      The 7th Annual Meeting of AOCC
    • 国際学会
  • [学会発表] 潰瘍性大腸炎における上部消化管病変の検討2019

    • 著者名/発表者名
      山田聡 山本修司 本澤有介 妹尾浩
    • 学会等名
      第102回 日本消化器内視鏡学会 近畿支部例会
  • [学会発表] Reactivation of Epstein-Barr virus in the colonic mucosa of active ulcerative colitis2019

    • 著者名/発表者名
      Satoshi Yamada, Shuji Yamamoto, Hiroshi Seno
    • 学会等名
      JDDW 2019
  • [学会発表] Efficacy and safety of tacrolimus therapy for elderly patients with ulcerative colitis2019

    • 著者名/発表者名
      Yusuke Honzawa, Shuji Yamamoto, Makoto Okabe, Hiroki Kitamoto, Satoshi Yamada, Hiroshi Seno
    • 学会等名
      The 7th Annual Meeting of AOCC
    • 国際学会
  • [学会発表] クローン病狭窄例に対する経鼻内視鏡を用いた小腸内視鏡の試み-よりよい内視鏡評価を目指して-2019

    • 著者名/発表者名
      本澤有介、山本修司、妹尾浩
    • 学会等名
      JDDW 2019
  • [備考] 京都大学大学院医学研究科・消化器内科学ホームページ

    • URL

      http://www.kuhp.kyoto-u.ac.jp/~gastro/gastro.html

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公開日: 2021-01-27  

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