2018 年度実施状況報告書

NAFLD/NASHにおける小胞体ストレス及びオートファジー関連機序の解明

研究課題

研究課題/領域番号	18K15832
研究機関	産業医科大学
研究代表者	林倫留産業医科大学, 医学部, 修練指導医 (70717785)
研究期間 (年度)	2018-04-01 – 2021-03-31
キーワード	小胞体ストレス / オートファジー
研究実績の概要	生活習慣の変化に伴い、国内にはNAFLD/NASHの人数は急増している。NASHの病態にはオートファジー機能異常及び小胞体ストレスが深く関連しており、異常蛋白蓄積がNASHの進展に関与していると考えられている。小胞体ストレスは肝脂肪化との悪性サイクルを形成し、インスリン抵抗性をも増悪させ、さらなるNASH悪化を引き起こす事が報告されている。我々は、Mallory-Denk Body(MDB)がオートファジーの分解器質であるp62蛋白を含む凝集体であり、プロテアソームの阻害剤で再現できる事、オートファジーの亢進でMDBが減少する事を報告した（Harada M, Hepatology, 2008）。また、飽和脂肪酸が小胞体ストレスを惹起し、オートファゴソームとリソソームとの融合段階を阻害する事を報告した（Miyagawa K, Am J Pathol, 2016）。小胞体ストレスを誘導する既知の薬剤は数種類あるが、それがどの様に酸化ストレス、オートファジー、アポトーシス等に影響を与えるかは明らかではない。我々は、これらの薬剤の効果や作用機序に関して検討中である。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由小胞体ストレス誘導剤であるタプシガルジン、ツニカマイシン、ピュロマイシン投与を行い、Western blotでオートファジーへの影響を検討した。タプシガルジンにおいては、バフィロマイシン併用負荷により、オートファジーの後期段階の障害が行われている事を確認した。また、mRFP-GFP-LC3を用いて、autophagic fluxの解析を行った。現在、ツニカマイシン、ピュロマイシンのオートファジー、酸化ストレス、アポトーシスへの影響を検討中である。
今後の研究の推進方策	上記の小胞体ストレス誘導剤の作用機序を明らかにし、その他の薬剤と併用時の肝細胞に与える影響を検討する。また。酸化ストレスへの防御機構であるNrf2-Kaep1系に対する小胞体ストレス誘導剤の作用も検討する。
次年度使用額が生じた理由	この研究は、科研費に採択される以前から行っていた研究であるため、当該年度は既存の細胞、試薬、実験器具を使用した。未使用額は次年度へ繰り越す。また、In vivoでの実験のため、ヌードマウスおよび飼料、マウス投与薬物の購入、および実験試薬の購入を行う予定である。