| 研究課題/領域番号 |
18K15944
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
須田 理香 千葉大学, 大学院医学研究院, 特任助教 (90779795)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 慢性血栓塞栓性肺高血圧症 / 血管リモデリング / 血管内皮細胞 |
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| 研究実績の概要 |
慢性血栓塞栓性肺高血圧症(以下CTEPH)では器質化血栓による血管閉塞に加え、肺動脈内の細胞増殖によりリモデリングが起こる。治療の進歩により予後は改善しているが依然治療抵抗例が存在し、治療抵抗例の主病態と考えられている肺動脈のリモデリングを標的とした新規治療の開発が国際的に望まれている 。
本研究は、肺動脈リモデリングの細胞増殖を増殖細胞の起源の解明と細胞増殖へのテロメア短縮やテロメラーゼ活性上昇の関与の2点に着目して解明することにより、未だ確立されていないリモデリング抑制をターゲットとした治療法の開発へ臨床応用し、治療抵抗例の予後改善を目指すものである。
COPDに伴う肺高血圧症では、末梢血のテロメア短縮と肺動脈リモデリングの重症度の相関や、老化細胞からの増殖因子様物質が報告されている。そこでCTEPH患者の末梢血のDNAのテロメア長を測定し、テロメア長と患者臨床情報とを比較検討した。末梢血のテロメア短縮とCTEPHの血行動態の重症度には有意な相関は認められず、肺高血圧症を伴わないCTED症例とCTEPHとの比較でもテロメア長に差は認めなかった。この結果からは、CTEPHにおいてはCOPD-PHで報告された肺動脈リモデリングとテロメア短縮や、老化細胞からの増殖因子様物質とは関連ないことが推測された。
一方、肺動脈内膜摘除術により摘出された肺動脈内膜と器質化血栓を含む検体から単離した血管内皮細胞の増殖能が高いことに反して、間葉系細胞は細胞増殖能が著明に低下しており、血管内皮細胞においてテロメラーゼの構成要素であるTERTの発現が確認された。これらの結果より血管内皮細胞が血管リモデリングの細胞増殖を引き起こしていることが示唆された。また、増殖細胞中にCD31陽性CD45陽性細胞が認められ、骨髄由来の細胞の関与も示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
増殖細胞の起源の解明のためにフローサイトメトリーを行っているが、一時結果にばらつきが生じ、結果のばらつきが抗体の不具合によるものと判明するまで、原因解明に時間がかかり遅れが出てしまった。
また、肺血管内皮細胞(CD31+CD45-)が増殖細胞の主体と推測していたが、CD31＋CD45＋の骨髄由来細胞の存在が判明し、この２種類の細胞の比較検討を開始しようとしたが、CD45による磁気ビーズを用いた単離にも難渋し、遅れが出ている。
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| 今後の研究の推進方策 |
骨髄由来(CD45+)のCD31陽性細胞(BM-CD31+)とCD31+CD45-の肺血管内皮細胞(PVEC)をそれぞれ単離する。３種類のCD31陽性細胞（BM-CD31+、PVEC、正常ヒトPVEC）と単離間葉系細胞(CD31-CD45-)、正常ヒト肺動脈平滑筋細胞をそれぞれ共培養し、細胞の増殖能の変化、形質の変化を検討し、網羅的な遺伝子解析等から増殖シグナルを解明する。
また、増殖因子が含まれている可能性があるBM-CD31+、PVECの培養液を回収し、正常ヒトPVECと正常ヒト肺動脈平滑筋細胞に添加し、増殖能の変化を検討し、増殖が認められた際には、培養液の増殖因子の解析と阻害実験による増殖因子の道程をおこなう。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
抗体の不具合や実験手技の習熟のために解析に遅れが出ており、次年度使用額が生じたが、今年度遅れた分に関しては次年度に行う予定である。
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