研究課題
本研究の目的は乳児期発症のアトピー性皮膚炎に関わる母乳中のmiRNAを解析することにより乳児アトピー性皮膚炎の発症機序を解明することにある。本研究で用いる母乳は千葉市でのハイリスク出生コホート研究（CHIBA study）を用いた。本研究において1歳時点での卵白感作に関わる因子として多変量解析を行ったところ乳児湿疹、アレルギー疾患の家族歴、男児に加えて母乳栄養（OR:2.64, 95%CI: 1.45-4.81）がリスクであることが分かった(Pediatr Allergy Immunol. 2020;31:315-318.)。また、保湿剤、シンバイオティクスを用いた介入研究にても同様に卵白感作のリスク因子として母乳栄養（OR:1.79, 95%CI: 1.13-2.84）があげられた。この結果より母乳栄養中の免疫物質、microRNA等が関わっている可能性がある。また、同コホート研究（CHIBA study）での母乳中のmicroRNAを解析した結果、hsa-miR-342-5p、hsa-miR-551b、hsa-miR-4520が6か月時のアトピー性皮膚炎と関連があった。In silico解析でhsa-miR-342-5pはVEGF、TGFb signalingに関わっていた。今後、hsa-miR-342-5pの機能解析を今後行っていく予定である。
3: やや遅れている
新型コロナウイルスの影響で実験に現在支障をきたしており、今後遅れる可能性が高い。
【同定されたmiRNAが児に移行しているかの解析】本コホート研究における1歳時の血清中miRNAはExiqon社のmiRCURY RNA Isolation-Biofluids kitを用いて抽出してあり、保存されている。このmiRNAを用いてreal-time PCRを行い、母乳中のmiRNAプロファイルと児の血清中miRNAプロファイルを検討する。【同定されたmiRNAの機能解析】Target scan, PicTar, microRNA.org等のmiRNA研究において汎用されているデータベースを用いて同定されたmiRNAの標的遺伝子をin silicoで同定する。アトピー性皮膚炎発症に重要なCD4+ T細胞及びケラチノサイトを用いてmiRNAをトランスフェクションする。標的遺伝子をreal-timePCRで発現が低下するか確認する。解析された標的遺伝子により細胞機能の変化がみられるか、細胞上清を用いてサイトカインの測定をELISAを用いて検討する。
本年度にmicroRNAの機能解析まで進むことができなかったため、機能解析用の試薬を購入しなかった。来年度は培養細胞を用いてmicroRNAの遺伝子導入を行い、機能解析を進めていく予定である。
すべて 2020 2019
すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (4件) (うち国際学会 3件、 招待講演 2件) 学会・シンポジウム開催 (1件)
Pediatr Allergy Immunol
巻: 31(3) ページ: 315-318
10.1111/pai.13208
Int Arch Allergy Immunol
巻: 180(3) ページ: 202-211
10.1159/000501636.
World Allergy Organ J
巻: 1;12(10) ページ: 100065
10.1016/j.waojou.2019.100065.
Nutrients
巻: 5;11(9) ページ: 2118
10.3390/nu11092118.
