| 研究実績の概要 |
H31年度、新規Uncontrollable T細胞の候補の探索として、xenogenic-GVHDを発症するヒト化マウスによる手法を用いて解析を行った。NOGマウスにヒト末梢血のCD４陽性T細胞（1x10^7 cells）を養子移入し、x-GVHDを起こす系に、A）Treg抑制因子としてCTLA-4-Igの介入、B)コントロール を行い、Day7（xenogenic GVHDがまだ明確でない時期）に両群のSplenocyteを採取した。より詳細で多次元のT細胞表現系解析を行うため、Mass Cytometry を用いた解析を行うこととした。マウスのSplenocyteを当研究室にてFludim社のCyTOF対応抗体を用いて染色し、、次のT細胞関連因子25因子の解析を行っている.(CD3,CD4,CD8a,CD45RO,,CD45RA, CD25 (IL-2R),CD127 (IL-7Ra),CD183 (CXCR3),CD194/CCR4,CD196 (CCR6),CD161,CD195 (CCR5),CD197 (CCR7),CD185/CXCR5,HLA-DR,CD38,CD28,CD134(OX40),CD95/Fas,TIM-3,CD279 (PD-1),CD152 (CTLA-4),CD278/ICOS,CD137/4-1BB,CD223/LAG-3)。これを聖路加医学生物学研究所に依頼し、Mass Cytometry解析を行った。現在、統計ソフトウェアRを用いて、High dimensional analysisを行っている。
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| 今後の研究の推進方策 |
R2年度、次の研究を行い、研究を完遂する予定である。
１） hNOGマウスのA）Treg抑制因子 CTLA-4-Igの介入、B)コントロールの両群において、B群と比較しA群でKi67発現が増加している細胞表面の網羅的スクリーニング解析を行う。このために242種類の表面マーカーを解析可能なBD社のキット（BD Lyoplate, human cell surface marker screening panel）を用いる。その中でA群においてKi67が高発現のものから5-10種類くらいの表面抗原を選別、候補を同定する。
２）H31年度に行った、A群、B群のマウスSplenocyteのMass Cytometry解析結果を用いて次の解析を行なう。候補の表面マーカーの組み合わせから、既知のThサブセットにとらわれず、恣意性なく解析するために、私たちは、tSNE法による次元削減法（Journal of Machine Learning Research 9 (2008) 2579-2605, Flow Joソフトウェアと、統計ソフトRにより可能）を用いた解析を用いる（右図）。（これにより、多次元データを統計学的なクラスター解析により適切なクラスター（恣意性を排除）に分類し、それぞれにおける最適な表面マーカーの組み合わせを探索できる）。これにより、Unc-T cellsの候補の表面マーカーを同定するところまで本研究において明らかにする。
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