| 研究課題/領域番号 |
18K16187
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| 研究機関 | 金沢医科大学 |
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研究代表者 |
河合 泰宏 金沢医科大学, 金沢医科大学氷見市民病院, 准教授 (10388936)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | Mycoplasma hominis |
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| 研究実績の概要 |
Mycoplasma hominisは、骨盤内炎症性疾患（pelvic inflammatory disease：PID）や帝王切開術後感染症などの周産期病態との関連や従来効果のある抗菌薬に対する耐性が報告されている。
マイコプラズマ属は細菌蛋白を宿主へ注入し、宿主細胞内での生理的機能を撹乱することにより病原性を発揮していると予想される。M. hominisの病原因子の同定により、新たなマイコプラズマ属感染の治療・予防および持続感染による慢性炎症の予防・進行阻止が期待できる。
M. hominisの全ゲノム情報を基に、機能未知遺伝子を選抜し、それぞれに対する1対のプライマーを作製した。M. hominisのATCC23114株を液体培地で培養し、培養液からゲノムの抽出を行った。抽出したゲノムから得られたPCR産物を、酵母用ドナーベクターにクローニングを行い、クローニング後、それぞれのクローンの塩基配列の確認を行い、-80℃に保存し、スクリーニングに備えている。
ATCC株だけでなく、臨床分離株についても、培養、ゲノム抽出を行い、既に機能が明らかにされている一部の遺伝子配列について解析を行った。
作製したライブラリーを酵母株に形質転換し、網羅的にM. hominis病原因子候補をスクリーニングするために、酵母発育用の培地や酵母遺伝子発現を調整する誘導培地の作成、酵母培養用の高精度型インキュベーターの設置準備など、酵母発現系の実験環境の整備を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
所属の変更や新型コロナウイルス感染症の拡大もあり、酵母発現系実験を実施する実験環境を整備している段階である。
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| 今後の研究の推進方策 |
現時点では、新型コロナウイルス感染症の拡大もあり速やかな研究の推進は困難であるが、感染防止に最新の注意を払いながら、今年度に出来なかった以下を遂行する。
M. hominisの機能未知遺伝子ライブラリーを酵母株に形質転換し、網羅的にM. hominis病原因子候補をスクリーニングする。誘導培地での過剰発現によりi) 致
死になるもの、ii) 液胞蛋白質マーカーを分泌するものを病原因子候補とする。
Green Fluorescent Protein (GFP)で標識した病原因子候補をHeLa細胞に導入し、病原分子の細胞内局在を種々のオルガネラマーカーと比較し共焦点レーザー顕
微鏡を用いて解析する。
また、病原分子を導入した際の経時的な細胞の変化を、タイムラプス蛍光顕微鏡を用いて細胞生物学的および生化学的に解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
所属の変更や新型コロナウイルス感染症の拡大もあり、酵母発現系実験の準備に時間を要しており、高精度型インキュベーターとマイクロチューブミキサーを次年度購入予定とした。
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