| 研究課題/領域番号 |
18K16216
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| 研究機関 | 広島国際大学 |
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研究代表者 |
瀧野 純一 広島国際大学, 薬学部, 講師 (00440529)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 膵臓がん / HNRNPM / MIA Paca-2 |
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| 研究実績の概要 |
我が国における膵臓がん患者の生存率は、極めて低い。これは、膵臓がんの早期発見が困難であることに加え、他のがんと異なり一般的に乏血性環境下（血流が乏しく酸素や栄養供給が少ない環境）でも生存可能なメカニズムを持つことに起因している。そのため、この乏血性環境耐性メカニズムに対する特効薬の開発が望まれているが、その獲得機構については未だ解明されていない。これまでに申請者は、ヘテロ核リボ核酸タンパク質の1つであるheterogeneous nuclear ribonucleoprotein M（HNRNPM）のヒト各臓器mRNA発現解析において、他の臓器と比較して膵臓で最も高発現していることを見出している。さらに、膵臓で高発現しているHNRNPMは健常人や糖尿病患者と比較してがん患者で著しく減少することも見出しており、がん化や悪性化にHNRNPMの発現減少が関与しているのではないかと考えている。そこで、本研究では乏血性環境下にある膵臓がんにおけるHNRNPMの影響を解明することで抗癌剤および早期診断マーカー開発に向けた基礎研究を行うことを目的とする。
HNRNPMをsiRNAによってノックダウンした膵臓癌細胞株MIA Paca-2は、乏血性環境を模した低グルコース条件下で細胞生存能を延長し、糖代謝を変化させることを見出した。また、HNRNPMノックダウンによって変動する遺伝子をマイクロアレイ解析によって網羅的に解析することで、426遺伝子の発現が1.5倍以上増加し、229遺伝子の発現が1.5倍以上減少することを明らかにした。今後は、HNRNPM発現減少が引き起こす影響に関連する遺伝子変化等を解析していく予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度では、HNRNPMの発現をsiRNAによってノックダウンすることによって、低グルコース条件下での細胞生存能が延長し、グルコース取込み能が有意に減少することを明らかにした。また、HNRNPMノックダウンによって、426遺伝子の発現が1.5倍以上増加し、229遺伝子の発現が1.5倍以上減少することがDNAマイクロアレイ解析により明らかとなった。また、Gene Ontology解析によって遺伝子の機能分類を行い、グルコース取り込みに関する5種類の遺伝子とアポトーシスに関する9種類の遺伝子に着目した。これらの遺伝子候補からRT-PCRによって偽陽性の遺伝子を除外し、アポトーシスに関わる1遺伝子がHNRNPMノックダウンよって、その発現量を減少させることが確認できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
DNAマイクロアレイ解析およびGene Ontology解析によって得られたデータで未だ検討できていない遺伝子に対して偽陽性の確認作業を行う。また、HNRNPMの一過的な発現減少ではなく長期的な発現減少による影響を観察するため、HNRNPMをターゲットとしたCRISPR-Cas9ベクターを構築し、そのノックアウト株を作製する。次に、HNRNPMノックアウト株を用いて遺伝子およびタンパク質発現変化を解析することで膵臓がんにおけるHNRNPM発現減少が及ぼす影響を検討したい。
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