| 研究課題/領域番号 |
18K16362
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
菊地 覚次 岡山大学, 大学病院, 助教 (40736584)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 胃癌 / 腹膜播種 / 腫瘍溶解ウイルス / 癌関連線維芽細胞 / 腹腔内治療 |
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| 研究実績の概要 |
胃癌腹膜播種の癌微小環境を解明するために、まず外科的切除された胃癌腹膜播種結節を免疫染色で解析したところ、CAF(cancer-associated fibroblast)マーカーであるα-SMAおよび腫瘍免疫抑制的に働くIL-6は16例全例で高発現しており、腫瘍免疫として働く腫瘍浸潤リンパ球(CD8+ T細胞)はごく少数であった。この結果から腹膜播種における癌微小環境において、CAFが重要な役割を果たしている可能性が示唆された。
また、胃癌細胞株に対して、p53搭載多機能性腫瘍溶解ウイルス(OBP-702)の抗腫瘍効果をXTT assayにて解析し、パクリタキセル(PTX)との併用治療による相乗効果も証明した。
次に食道線維芽細胞(FEF3)や臨床検体から樹立した非癌部胃線維芽細胞(NGF)に対してTGF-βや癌細胞培養液刺激により、人工的にCAFを作成し、CAFに対するOBP-702の効果について検証したところ、OBP-702の作用により、CAFマーカーであるα-SMAやFAPの発現が低下することをwestern blot解析で証明した。さらに、OBP-702はFEF3、NGFの生存に対して影響を与えないのに対し、CAFに対しては生存率を低下させることがわかった。臨床検体を用いて、胃癌組織からCAF(GCAF)を樹立し、NGFと比較すると、GCAFはNGFに比べて、α-SMAを高発現しており、PTXに対して抵抗性を示した。OBP-702を作用させると、NGFの生存には影響を与えないが、GCAFに対しては殺細胞効果があることがわかった。さらに、GCAFはNGFに比べてIL-6の分泌が亢進していたが、OBP-702投与により低下することが確認された。この結果から、OBP-702は癌細胞に抗腫瘍効果を示すのみでなく、腫瘍増殖に関わるCAFに対しても抑制的に働くことが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
外科的に切除された臨床検体を用いた解析では、切除された腹膜播種の解析について、CAFや免疫関連マーカーの免疫染色を行い、胃癌腹膜播種においてCAFとの関連を示唆するような結果を得て、想定していた通りに進んでいる。
また、胃癌細胞株に対して腫瘍溶解ウイルス(OBP-702)の抗腫瘍効果を証明することができた。さらにはパクリタキセル(PTX)との併用による相乗効果も示すことができ、当初想定した結果が得られている。
さらに、OBP-702は、がん細胞に対する殺細胞効果のみならず、腫瘍の増殖や進展に関わる癌微小環境中のCAFに対しても抑制的に働くことがわかり、癌細胞とCAFを制御した強力な抗腫瘍効果が期待できる。
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| 今後の研究の推進方策 |
OBP-702が癌細胞のみならず、癌微小環境中のCAFに対しても抑制的に働く可能性が示されたため、今後は正常線維芽細胞には作用せず、CAFにのみ抑制的に働くメカニズムについて解明を進める予定である。また、OBP-702投与によって、CAFからのIL-6分泌が抑制される結果が得られたが、他のサイトカインやケモカインについての分泌抑制効果についても検討する予定である。さらにvivoの解析では、胃癌腹膜播種マウスモデルを用いて、腹腔内投与によるOBP-702とPTXの併用治療による腫瘍増殖抑制効果を確認する。さらにヌードマウスにヒト胃癌細胞とCAFを混ぜて腹腔内に注入して、腹膜播種モデルを作成し、癌細胞のみ注入した時と比べて、腹膜播種の形成増強効果があるかどうかを検討し、OBP-702の腹腔内投与実験を行い、その治療効果についても検討する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験で使用する抗体や試薬等が所属研究室所有の既存のものを使用できたことと、順調に実験が進行したために、当初の予定より消耗品請求額を抑制することができた。さらに、学会出席による情報収集をwebや文献等による情報収集に代替したために、旅費を抑制することができた。しかし、今後マウスを用いた動物実験を予定しており、次年度に消耗品やマウスの購入が必要であると考える。さらに、研究成果の発表のために、次年度の予算には旅費が必要と感がる。
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