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本研究の概要は、生体内・外において注目されている間葉系幹細胞マーカーであるレプチン受容体(Leptin receptor;LepR)が骨髄環境に影響を与える調整機構を明らかにする事である。これにより、骨髄内の恒常性環境および病的環境を構築する決定因子を解明できる可能性がある。
本研究実施計画としては、申請者がこれまでに行ってきた細胞分離・可視化技術を用い、特定の細胞表面抗原を指標に細胞分離し、その細胞の動態を生体内・外で観察する。本研究に用いるdb/dbマウスはLepRの下流シグナルであるJAK2/STAT3経路に障害をもつものの、細胞表面にはLepR抗原を発現しているため、各種蛍光色素で標識したLepR抗体を用いることでフローサイトメーターにより細胞分離が可能である。本研究ではそのdb/dbマウスを用い、野生型マウス(Wild Typeマウス;WTマウス)と比較し、骨髄環境を解析する。WTマウスとdb/dbマウスを用いてフローサイトメーターで血球成分と血管内皮細胞を排除後、LepR(＋)細胞を分離した。分離後、生体外で培養し、間葉系幹細胞としての性質に差を有しているかを解析した。
間葉系幹細胞の培養法の特徴である血清添加培地による接着培養法で維持培養し、前年度同様、自己複製能とその他機能解析を評価したところ、コロニー形成能と倍加時間、遊走能において大きな差は生じなかった。また、骨および軟骨への分化能はWTマウスとdb/dbマウスで著しい差異は認められなかったが、脂肪分化に関してはdb/dbマウスが高い分化能を示した。
WTマウスとdb/dbマウスで造血機能に差異は認められなかったため、JAK2/STAT3の障害と脂肪分化能の特徴は造血作用に影響を及さない可能性が示唆された。
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