| 研究課題/領域番号 |
18K17110
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
猪狩 洋平 東北大学, 大学病院, 助教 (10734270)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 老化 / 骨欠損修復 / 網羅的遺伝子解析 / マウス |
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| 研究実績の概要 |
老化が骨欠損修復に与える影響については生物学的知見が乏しく、老齢個体の骨修復における分子メカニズムは未だ不明である。そこで、本研究は「高齢者と若年者とで、骨欠損修復における分子メカニズムは異なるのか」を調べることを目的とする。
当該年度は、マウス頭頂骨に作製する規格化骨欠損のサイズを直径2.4mmとし、サンプリングのタイムポイントに関しては、新たに12週を加えた、術後2週、4週、6週、8週、12週でサンプリングを行った。若齢マウス(10週齢)、老齢マウス（50週齢)ともに頭頂骨規格化骨欠損の作製及び各タイムポイントでのサンプリングは終了し、順次マイクロCT撮影を行っている。マイクロCT撮影が終わった試料は、組織学的検討に用いる試料として、脱灰後にパラフィン包埋を行い、5μm厚の薄切切片を作製する予定である。当該年度においては、まず脱灰期間の検討を行った。その結果、若齢マウスで4週間（1ヶ月）、老齢マウスで6週間（1ヶ月半）脱灰を行うことに決めた。現在、マイクロCT撮影後の試料を脱灰し、パラフィン包埋ブロックを作製している。
また、若齢マウスと老齢マウスにおいて、マイクロCT解析用の試料とは別に、骨欠損作製後4週の修復骨を採取して網羅的遺伝子解析を行うにあたり、その手法としてDNAマイクロアレイを用いる予定であったが、CAGE法に変更することを検討中である。現在、若齢マウスの修復骨を採取し、トータルRNAの抽出を試みているところである。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
若齢マウス、老齢マウスともに骨欠損の作製及び各タイムポイントでのサンプリングは終了し、順次マイクロCT撮影を行っている。また、マイクロCT撮影が終わった試料の組織学的解析（脱灰・パラフィン包埋・薄切切片作製）についても概ね順調に進んでいる。しかし、当該年度に開始予定であった網羅的遺伝子解析やリアルタイムPCR等の分子生物学的解析が進んでおらず、本研究の進捗には遅れが生じている。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続きマイクロCT撮影を行い、撮影が終わった試料は順次、脱灰後にパラフィン包埋、薄切切片の作製、組織学的検討を行う。
また、骨欠損作製後2週・4週・6週・8週・12週で骨欠損内部にできた修復骨を採取し、超音波ホモゲナイザーで破砕後にトータルRNAを抽出して網羅的遺伝子解析を行い、老齢マウスと若齢マウスとを比較して特徴的な遺伝子発現を示す分子を同定する。
さらに、同定された特徴的な分子についてSYBRグリーンⅠを用いたReal-time PCR法でmRNAの発現量を調べ、統計学的に比較検討を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
マイクロCT解析や組織学的解析については概ね順調に進んでいるものの、網羅的遺伝子解析やリアルタイムPCR等の分子生物学的解析については遅れが生じているため、未使用額が発生した。次年度予定しているこれらの実験を行うための費用として次年度請求額と合わせて使用する予定である。
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