| 研究課題/領域番号 |
18K17209
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| 研究機関 | 日本歯科大学 |
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研究代表者 |
井出 良治 日本歯科大学, 生命歯学部, 講師 (10638084)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 関連痛 / 篩状神経節 / 三叉神経節 / デキサメデトミジン / パッチクランプ法 |
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| 研究実績の概要 |
近年、心疾患や肺癌など、内臓疾患の痛みが迷走神経を介して中枢に伝わり顎顔面口腔領域に関連痛を起こす可能性が指摘されている。しかし、現在までその詳細な機序は未だ不明である。本研究は、蛍光トレーサーを用いて乳幼仔ラットのnodose ganglion（NG）（迷走神経節の１つ)から心臓由来の一次知覚neuronを検出する新規技術を基盤とし、Fluoro-Gold (FG) を内臓（心臓・肺・腸管）に、DiC18(DiI)を三叉神経領域にinjectionする。内臓知覚neuron（一部）と顎顔面口腔知覚neuronの中枢枝はそれぞれnodose ganglionとtrigeminal ganglion（三叉神経節）を介して脳幹に投射する、末梢枝から神経節を経て軸索輸送されるFGとDiIを脳幹レベルで組織学的に検出し、本研究により、内臓痛が三叉神経領域に関連痛として現れる機序の解明を目的とする。
現在までに新生児ラットNGニューロン対し、ホールセルパッチクランプ法を用いてテトロドトキシン抵抗性（TTX-R）を投与後活動電位の発生を確認しその後、一般的に鎮静薬とし用いられるナトリウムチャネルブロッカーであもるデキサメデトミジン（DEX）500μM投与による活動電位の消失を確認した。
今後は、先の実験データ数が少ない為、まずこの実験を継続して行う。その後このデータ結果を基に、心筋へ逆行性神経トレーサー注入し逆行性に標識されたNGニューロンを対象とした電気性理学的解析（ホールセルパッチクランプ法）を行いその特性を解明する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
新生児ラット篩状神経節ニューロンに対し、ホールセルパッチクランプ法を用いてテトロドトキシン抵抗性（TTX-R）電位依存性ナトリウム電流（INaR）を測定し、一般的に鎮静薬とし用いられるナトリウムチャネルブロッカーであるデキサメデトミジン投与によるINaRの抑制（IC50＝128 μM）を確認し、その後活動電位の発生の抑制まで確認した。
しかし、当初の予定していた新生児ラットの脳幹の透明化を行なう予定であったが、未だ完全な透明化にはいたっていない為。
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| 今後の研究の推進方策 |
確立することができなかった①新生児ラットの脳幹の透明化を確立する。それと平行して現在までに得られた結果を元にさらに詳細な検討を行なう。具体的には前年度までは単離・培養した全て篩状神経節ニューロンを対象としてホールセルパッチクランプをおこない②DEX投与による活動電位の変化測定の実験数を増やし③心筋へ逆行性神経とレーサー注入し逆行性に標識された篩状神経節ニューロンを対象とした電気性理学的解析（ホールセルパッチクランプ法）を行いその特性を解明する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初の予定していた新生児ラットの脳幹の透明化を行なう予定であったが、未だ完全な透明化にはいたっておらずその先使用予定であった抗体の費用及び、第97回日本生理学会大会（大分）が新型コロナ感染症の影響により誌上開催となったため。
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